膵癌における反復配列RNAの機能解析と治療選択最適化への応用

胰腺癌重复序列RNA的功能分析及其在优化治疗选择中的应用

• 批准号: 22H02828
• 负责人: 大塚 基之
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Okayama University (2023)The University of Tokyo (2022)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02828/
• 关键词: 膵がん; 反復配列RNA

通常の解析では解析対象から外されることの多い反復配列RNAと呼ばれる特徴的な配列を持つnon-coding RNAが 膵癌で高発現しており、それを血中で高感度に検出可能にする方法（TRAP-digital PCR法）を考案して癌スクリーニングでの有用性を見いだした。本年は、その新たな展開として、ヒト膵発癌過程の早期から異常発現してくる反復配列RNAのひとつであるHSTII-RNAについて、癌化プロセスにおける生物学的な機能を解析することとした。HSATII RNAを発現するコンストラクト（基本となる配列を3つ連結したもの）をヒト不死化膵管上皮細胞に発現させ、a) RNA sequencing による遺伝子発現変化、b) 細胞内シグナル伝達機構の活性化状態の変化、c) HSATII RNAに結合する蛋白の同定、を中心としてHSATII RNA発現がもたらす機能変化を解析する予定として、特にRNA IP と質量分析によって同定したHSATII RNAと結合する蛋白に、Smc6蛋白 に着目した。Smc6蛋白はSmc5蛋白らと複合体を作り染色体安定性や相同組み換え修復に寄与するが、HSATII RNAの細胞内局在は細胞質が主体のため、細胞癌化の観点からは「RNAによるDNA修復蛋白の細胞質での捕捉が 遺伝子変異蓄積を惹起する」と考え、「遺伝子変異の惹起」とリンクする現象について注目した解析を進めている。実際に、HSATII RNA発現細胞ではDNA障害のマーカーであるgH2AXの発現が核内で増えていることも確認した。反復配列を持つRNAの研究は近年少しずつ散見されてきたが、シークエンスの反復性のために扱いにくい研究対象であることは変わらない。HSATII RNAに関しては、「CTCFの機能を変化させ慢性炎症を惹起する」ことが報告されたが、我々の検討結果とは相違点もあり、さらなる研究が必要と考えている。

非编码RNA具有独特的序列称为重复序列RNA，通常在胰腺癌中高度表达，通常将其排​​除在正常分析中，并且一种使其对在血液中可检测到的可检测到的方法（TRAP-Digital PCR）被设计为在癌症筛查中找到其有用性。今年，作为一种新的发展，我们决定分析HSTII-RNA的生物学功能，HSTII-RNA是癌症过程中从人类胰腺癌作用过程的早期阶段表达的重复性RNA之一。 We will focus on the Smc6 protein, which focuses on the expression of HSATII RNA (three basic sequences are linked) by human immortalized pancreatic duct epithelial cells, focusing on a) changes in gene expression due to RNA sequencing, b) changes in the activation state of intracellular signaling mechanisms, c) identification of proteins that bind to HSATII RNA, and focusing on the Smc6蛋白质，特别是在与HSATII RNA结合的蛋白质上，该蛋白通过RNA IP和质谱法鉴定。 The Smc6 protein forms complexes with the Smc5 proteins and contributes to chromosomal stability and homologous recombination repair, but since HSATII RNAs are mainly localized in the cytoplasm, from the perspective of cell carcinogenesis, it is believed that "capturing DNA repair proteins in the cytoplasm by RNAs causes accumulation of gene mutations," and is conducting analysis focusing on the将“诱导基因突变”联系起来的现象。实际上，已经证实，表达HSATII RNA的细胞中DNA损伤的标记GH2AX的表达增加。近年来，对具有重复序列的RNA的研究逐渐进行，但是序列的重复性质仍然没有变化，这是繁琐的研究主题。关于HSATII RNA，据报道，它“改变了CTCF功能并引起慢性炎症”，但与我们的研究结果存在差异，需要进一步的研究。

项目成果

Smaller extracellular vesicles are released from pancreatic cancer cells by the alteration of the lipid composition under low glucose conditions

在低葡萄糖条件下，通过脂质成分的改变，胰腺癌细胞释放出较小的细胞外囊泡

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.11.040
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Shibata Chikako;Otsuka Motoyuki;Seimiya Takahiro;Ishigaki Kazunaga;Miyakawa Yu;Kishikawa Takahiro;Fujishiro Mitsuhiro
• 通讯作者: Fujishiro Mitsuhiro