EGFRの脂質ラフト抑留機構を標的とした新たな頭頚部癌治療戦略の開発

针对EGFR脂筏保留机制开发新的头颈癌治疗策略

基本信息

批准号：
22K20997
负责人：
劉隣
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20997/
关键词：
EGFR CYLD セツキシマブ脂質ラフトエンドサイトーシス

项目摘要

本研究は、腫瘍抑制遺伝子であるCYLD を基軸としてEGFRの動態制御機構を解明し、有効な EGFR標的治療戦略を開発することを目的とする。CYLDの発現を抑制すると、EGFRが脂質ラフトに拘束されることでエンドサイトーシスが阻害され、CTX耐性を示すことが判った。さらにコレステロール除去によって脂質ラフトを崩壊させると、エンドサイトーシスの回復によりCTX耐性が克服された。そのため、CTXとコレステロール降下薬との併用は治療効果の改善に有用であると考えられる。しかし、CYLDがどのように脂質ラフトにおけるEGFRの動態を制御するのか、コレステロール降下薬の併用がCTX 感受性増強や耐性克服に有用かどうかはまだ明確でない。申請者らは脂質ラフト上でCYLDとEGFRが共局在していることを明らかにしている。脂質ラフトにはチューブリンが局在しており、CYLDのドメインのひとつであるCAP-Gly1はチューブリンや微小管の動態を制御していることが知られている。そこで、ラフトにおけるCYLDとEGFRやチューブリンとの相互作用やチューブリンの修飾を解析し、CYLDの発現の有無が脂質ラフト上のチューブリンの動態にどう影響しているのかを解析する必要があると考えた。野生型および各ドメインを欠損したCYLDをHNSCC細胞株に発現させた細胞株にスクロース密度勾配超遠心分離法を用いてそれぞれの細胞成分を分画した。各種解析により、脂質ラフトは細胞膜と細胞質に多量に存在していることがわかったが、CYLDやEGFRの検出には至っていない。また、申請者らは細胞株でコレステロール降下薬がCTX 耐性を克服されたという結果を得ているため、前臨床的治療研究としてCYLD 発現を抑制した HNSCC 細胞株をマウスに移植し、各種コレステロール降下薬がCTXに及ぼす効果を現在検討中である。

本研究的目的是阐明基于抑癌基因CYLD的EGFR动态调控机制，并制定针对EGFR的有效治疗策略。研究发现，当CYLD表达受到抑制时，EGFR被限制在脂筏中，抑制内吞作用并表现出CTX耐药性。此外，当脂筏因胆固醇去除而受到破坏时，CTX 抗性可通过恢复内吞作用而克服。因此，CTX与降胆固醇药物的组合被认为有助于提高治疗效果。然而，目前尚不清楚CYLD如何控制脂筏中EGFR的动态，以及降胆固醇药物的组合是否有助于增强CTX敏感性和克服耐药性。作者揭示了 CYLD 和 EGFR 在脂筏上共定位。微管蛋白位于脂筏中，而 CAP-Gly1（CYLD 的结构域之一）已知可控制微管蛋白和微管的动态。因此，有必要分析CYLD与EGFR和微管蛋白的相互作用以及微管蛋白在筏中的修饰，并分析CYLD表达的存在或不存在如何影响微管蛋白在脂筏上的动态。在 HNSCC 细胞系中使用蔗糖密度梯度超速离心分离细胞成分，其中表达了缺乏每个结构域的野生型和 CYLD。各种分析表明，细胞膜和细胞质中大量存在脂筏，但未检测到CYLD和EGFR。此外，申请人已经获得了降胆固醇药物克服细胞系中CTX耐药性的结果，因此作为临床前治疗研究，我们将CYLD表达受到抑制的HNSCC细胞系移植到小鼠体内并使用各种降胆固醇药物。研究药物对 CTX 的影响。