Effect of extracellular matrix from decellularized tissues on differentiation and migration of enteric nerve stem cells

脱细胞组织细胞外基质对肠神经干细胞分化和迁移的影响

• 批准号: 22K20655
• 负责人: 澁谷 聡一
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20655/
• 关键词: 再生医療; 組織工学; 脱細胞; ヒルシュスプルング病; 小腸機能不全; 腸管神経節; バイオリアクター; 神経幹細胞; Regenerative medicine; Tissue eingineering

ヒルシュスプルング病患児と腸管神経節が正常な患児のECMを比較するためヒルシュスプルング病根治術および乳児の人工肛門閉鎖術の手術時に検体を採取し蓄積している。できる限り同条件での比較を行うために脱細胞および組織評価は行っていない。実験に必要な環境を整えるために資材の購入、バイオリアクターとしてのポンプの動作確認を済ませ検体量が十分に達し次第(各群、3検体)、脱細胞を開始する予定である。ECMの比較を行う前の評価として脱細胞前の検体をホルマリン固定の行い切片を作成、神経節細胞の有無を非ヒルシュスプルング病患児との比較を行った。今後、これらに対してECMの免疫染色を行い脱細胞前後でECMが脱落しないかどうか比較するための指標とする。同実験の準備と同時に臨床データおよび病理データの収集を行っている。その中で、非ヒルシュスプルング病の患児の中でも病態によって神経節細胞の成熟度や絨毛の組織所見に違いが認められることがわかった。特に人工肛門の造設・閉鎖が行われた患児では人工肛門の肛門側を使用していた(便の注入を行っていたか)どうかで明らかな差が見られる。臨床データとの関連付けも可能であるので、今後は元々計画されていた評価に加えて人工肛門前後の腸管の比較も同時に行うことでさらなる知見を得られるようにする。今後、数名の患者がすでに手術を予定されているので検体の蓄積は半年以内に完了し、実験が速やかに開始できる見込みである。

为了比较先天性巨结肠儿童和肠神经节正常儿童的ECM，我们在先天性巨结肠根治手术和婴儿结肠造口闭合过程中收集并积累标本。为了尽可能在相同条件下进行比较，未进行脱细胞和组织评价。为了准备实验所需的环境，我们将购买材料并确认泵作为生物反应器的运行，一旦我们有足够数量的标本（每组3个标本），我们计划开始脱细胞。作为比较ECM之前的评价，将脱细胞前的样品用福尔马林固定，制作切片，将神经节细胞的有无与非先天性巨结肠症儿童进行比较。今后我们将对这些样本进行ECM的免疫染色，并以此为指标来比较细胞去除前后ECM是否不脱落。在准备实验的同时，正在收集临床和病理数据。其中，发现即使在非先天性巨结肠的儿童中，根据疾病状态，神经节细胞的成熟和绒毛的组织学表现也存在差异。特别是，在进行了结肠造口并闭合的患者中，根据是否使用结肠造口的肛门侧（粪便注射），可以看到明显的差异。由于这种方法可以与临床数据联系起来，未来，除了原计划的评估之外，我们还可以比较结肠造口前后的肠道，以获得进一步的了解。未来已有多名患者安排手术，预计六个月内完成标本积累，以便尽快开始实验。