免疫測定法による「田んぼの生きもの」の新たな簡易調査法

一种利用免疫分析研究“稻田生物”的简单新方法

• 批准号: 22K20605
• 负责人: 渡部 恵司
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20605/
• 关键词: イムノアッセイ; 田んぼの生きもの調査; 水生生物; 農業水路

本研究課題は、水田や農業水路の水に含まれる水生生物由来のタンパク質を免疫測定法（イムノアッセイ）により検出し、対象生物種の在否・多寡の推定可能性を探求することを目的とする。具体的には、①魚類や両生類などの対象生物種およびタンパク質を選定し、その検査試薬を作成する。②微量な対象タンパク質を検出できるように、効果的・効率的なサンプリング方法および前処理方法を明らかにする。③作成した方法による検出精度と検出力を示し、対象生物種の個体数密度の推定可否を明らかにする。本年度はこのうち①、および予備的に③に取組んだ。【①対象生物種の選定および検査試薬の作成】既存の抗原・抗体のデータベースの検索や既存の免疫測定キットの情報収集、免疫測定の受託試験を行う企業への聞き取りを行った。イムノクロマト法による既存キットとして、食品に含まれるアレルゲンの検査用に魚類および甲殻類の検査キットが、発電施設用にムラサキイガイ幼生等の検査キットが市販されていることが明らかになった。そこで、これらキットの利用可能性を追究する方針とした。【③検出精度、検出力および個体数密度の推定可否の検討】魚類および甲殻類の検査キットの検出精度と検出力を確認した。検出精度については、水路に生息する魚類（メダカ、ドジョウ、モツゴ、ヨシノボリ類）、両生類（ニホンアカガエル幼生、アズマヒキガエル幼生）、甲殻類（スジエビ類、アメリカザリガニ）、貝類（タイワンシジミ）をサンプルとして、魚類および甲殻類の検査キットによる検出可否を調べた。その結果、魚類の検査キットについては魚類のみ、甲殻類の検査キットについては甲殻類のみで陽性反応を呈することを確認した。また、検出力については、モツゴのサンプルについて10倍、100倍…と希釈して試験し、検出可能な濃度を把握した。

该研究主题旨在检测源自稻田和农业水道中水的水生生物的蛋白质，并探索估计目标生物存在和数量的可能性。具体而言，1）选择靶物种和蛋白质，例如鱼类和两栖动物，并为其创建试剂。 2）确定有效，有效的采样和预处理方法，以便可以检测到痕量的靶蛋白。 ③使用创建的方法显示了检测准确性和功率，并阐明是否可以估算目标物种的种群密度。今年，我们提前讲话了。 [1）选择目标物种并创建试剂]我们搜索了现有抗原和抗体的数据库，收集了有关现有免疫测定工具包的信息，并采访了进行合同免疫测试测试的公司。据透露，使用免疫色谱法的现有试剂盒包括针对食品中包含的过敏原的鱼类和甲壳类动物的测试套件，以及用于幼虫贻贝和其他动物发电设施的测试试剂盒。因此，计划是追求这些套件的可用性。 [3）检查检测准确性，功率和人口密度估计]鱼类和甲壳类测试套件的检测准确性和功率。关于检测准确性，我们研究了使用鱼类（Medaka，Loach，Roe，Roe，Roe Lily），两栖动物（日本红蛙幼体，Roe Toad larva），甲壳甲甲壳虫（Seaimpean，seaimp，cray鱼）和黑色（黑色的黑鱼）（黑色的（黑色鱼），黑色（black鱼）（黑豆类）（黑色的黑豆类（黑豆类），使用测试套件，是否可以使用鱼和甲壳类管进行检测。结果，已经确认仅将鱼试剂盒测试呈阳性，并且仅测试了阳性测试套件。此外，通过将Motsugo样品稀释10次，100次来测试检测能力，并确定可检测的浓度。