海綿由来レクチンを基盤とする糖鎖を介したサイトカイン受容体 新規活性化機構の解明

阐明基于海绵源凝集素的糖链介导的细胞因子受体的新型激活机制

• 批准号: 22K20589
• 负责人: 辺 浩美
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20589/
• 关键词: トロンボポエチン受容体; レクチン; 糖鎖; 海洋天然物

ThCのアミノ酸配列と類似した配列を持つタンパク質をBlast検索すると多くのバクテリア由来タンパク質がヒットするが、これらのほとんどはhypothetical proteinであり、タンパク質としての実態は不明である。そこで、これらのhypothetical proteinを大腸菌を用いて組み換えタンパク質として発現させ、活性を評価することを試みた。まず、ThCと配列相同性が特に高い７種のバクテリア由来タンパク質を調製し、これらのサンプルがThCと同様のTPO様活性を示すか培養細胞を用いて評価した。その結果、いずれのレクチンもThC以上もしくは同程度の活性を示すものは無く、ほとんどが数十分の1程度の活性に留まった。この原因として、一部は溶液中で沈殿が生じやすく、不安定なタンパク質である可能性が挙げられるが、アミノ酸配列、立体構造共に類似しているにもかかわらず、なぜThCのみが突出して強い活性を示すのかは不明である。また、本研究のベースとなる海綿由来新規レクチンThCによるTPO受容体活性化の詳細について論文を発表した。本報告では、ThCによるTPO受容体活性化機構の詳細を明らかにしたことに加え、ThCとPseudomonas属由来レクチンPA-IILの構造を詳細に比較し、活性の差が生じる原因を考察している。これは本研究内容とも深く関連するものであり、今後PA-IIL以外の発現レクチンも含めて比較することでThCのみが強い活性を示す理由について検討する。

爆炸搜索类似于THC的THC氨基酸序列的蛋白质会导致许多细菌蛋白质，但其中大多数是假设的蛋白质，而实际条件作为蛋白质是未知的。因此，我们尝试使用大肠杆菌评估这些假设的蛋白作为重组蛋白。首先，制备了具有特别高阵列同源的THC和七个细菌衍生的蛋白质，这些样品表现出类似于TPO的活性，类似于THC或使用培养细胞进行评估。结果，凝集素都没有表现出THC或更多或相同的活性，其中大多数的活性在几十分钟的活动中。其中一些原因是溶液中可能会发生沉积物，并且可能是一种不稳定的蛋白质，但是尽管氨基酸序列和三维结构都有相似之处，但只有THC突出而强。活动。此外，发表了一篇论文，内容涉及新海绵衍生的凝集素THC的TPO受体振兴的细节，这是本研究的基础。在本报告中，除了通过THC阐明TPO受体振兴机制的细节外，我们还考虑了通过比较源自THC和假单胞菌的凝集素PA-IIL的结构来造成活性的原因。这与这项研究的含量密切相关，我们将研究仅通过比较未来Pa-iil以外的表达凝集素表现出强大活性的原因。

项目成果

Interaction of Polyamine-modified Marine Peptide Aculeine A with Cell Membranes: Disruption or Entry

多胺修饰的海洋肽 Aculine A 与细胞膜的相互作用：破坏或进入

• DOI: 10.1246/cl.230009
• 发表时间: 2023
• 期刊: Chemistry Letters
• 影响因子: 1.6
• 作者: Watari Hiromi;Kishi Reimi;Matsunaga Satoko;Nishikawa Takayuki;Sawada Yuji;Honda Akito;Fujita Masaki J;Sakai Ryuichi
• 通讯作者: Sakai Ryuichi

海綿由来レクチン ThC によるサイトカイン受容体 新規活性化機構の解明

海绵来源的凝集素 ThC 阐明细胞因子受体的新激活机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Watari Hiromi;Kageyama Hiromu;Masubuchi Nami;Nakajima Hiroya;Onodera Kako;Focia Pamela J.;Oshiro Takumi;Matsui Takashi;Kodera Yoshio;Ogawa Tomohisa;Yokoyama Takeshi;Hirayama Makoto;Hori Kanji;Freymann Douglas M.;Imai Misa;Komatsu Norio;Araki Marito;Tanaka;辺浩美;辺浩美
• 通讯作者: 辺浩美