迅速な高性能蛍光免疫センサー構築を指向した直交ペプチドペアの高効率スクリーニング

高效筛选正交肽对，用于快速、高性能荧光免疫传感器构建

基本信息

批准号：
22K20477
负责人：
安田貴信
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、抗体ベースの高感度バイオセンサーQuenchbody（Q-body）の構築に適する直交ペプチドペアを高効率に選抜できる新規スクリーニング法を開発することである。既報のコイルドコイル形成ペプチドペアE4/K4を用いることで抗体断片を迅速にバイオセンサー化できることは実証済みだが、さらなる高感度化のためにE4/K4とは相互作用しないが親和性は高い別のペプチドペアが望まれた。そこで、このようなペプチドペアを獲得するためにファージと酵母を利用した新たなスクリーニング法を着想した。本年度は、研究計画に従いスクリーニング用にE4/K4に変異を導入することで逆平行結合が抑制される数種類のペプチドペアを設計・合成し、これを用いて作製したQ-bodyについて狙い通り逆平行結合が抑制されることを確認した。このK4変異体に関して、ペプチドと色素間のリンカーを幾つか検討することで従来よりも高い応答を示すQ-bodyが得られることも分かった。逆平行結合抑制ペプチドペアによる蛍光応答の向上は天然抗体を直接Q-body化可能なQ-probeに適用した場合に顕著で、従来4倍であった蛍光応答が13倍まで向上することが判明した。また、将来的に獲得したペプチドペアを使って構築する2色標識Q-body構築に向けて、比較用のモデルとしてH鎖とL鎖の両方に同じE4変異体が融合されたFab断片を用いてQ-bodyを構築できることも実証した。以上、今後のスクリーニング系構築に向けて鋳型として適切な結合方向が制御されたペプチドペアを創出することができた。

这项研究的目的是开发一种新的筛选方法，该方法可以高效地基于基于抗体的高敏化生物传感器（Q-boty）来高效地构建高敏化生物传感器（Q-body）。已经证明，抗体片段可以通过使用先前盘绕的线圈形成E4/K4来快速偏置，但它与E4/K4相互作用以进一步提高敏感性，但具有高亲和力的不同肽需要对。因此，我们设计了一种使用糊和酵母的新筛选方法来获取这种肽对。在这个财政年度，设计和合成了几种类型的肽对通过将突变引入E4/K4进行抑制，并合成了使用此功能的Q体，并使用此键证实了键。被压制。关于这个K4突变体，还发现可以通过检查肽和色素之间的某些接头来获得比以前更高的响应的Q体。当将天然抗体应用于可以直接转换为Q男式的Q-探针时，反向线抑制肽对的荧光响应的改善是显着的，并且已经发现荧光响应是4倍前4次提高到13次。此外，对于将来使用肽对构建的两色标志的构建，在H和L链中均在H和L链中结合了相同的E4突变体作为比较模型证明可以构建Q体。如上所述，我们能够创建一个被控制为未来筛查系统的模具的肽对。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

The Patrol Yeast: A new biosensor armed with antibody-receptor chimera detecting a range of toxic substances associated with food poisoning

巡逻酵母：一种配备抗体受体嵌合体的新型生物传感器，可检测一系列与食物中毒相关的有毒物质

DOI：
10.1016/j.bios.2022.114793
发表时间：
2023
期刊：
Biosensors and Bioelectronics
影响因子：
12.6
作者：
Jiulong Su;Bo Zhu;Akihito Inoue;Hiroyuki Oyama;Izumi Morita;Jinhua Dong;Takanobu Yasuda;Yoshiko Sugita-Konishi;Tetsuya Kitaguchi;Norihiro Kobayashi;Shiro Miyake;Hiroshi Ueda
通讯作者：
Hiroshi Ueda

逆平行結合抑制ペプチドペアを用いたクエンチ抗体の構築と評価

使用反向平行结合抑制肽对构建和评估猝灭抗体