日本産ショウロ「子実体過剰形成株」の分子遺伝学的解析

日本Choro“子实体形成过多品系”的分子遗传分析

基本信息

批准号：
22880017
负责人：
泉津弘佑
金额：
$ 1.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

マツタケやショウロをはじめとする菌根菌類は,一般的に人口栽培が極めてむずかしく,菌根共生無しには,子実体形成ができないのではないかと考えられている。本研究では,培地上でも子実体を形成する特殊な日本産ショウロの菌株に着目した。日本産ショウロの子実体過剰形成株Rr6f株は,寒天培地上で子実体を形成し,担子胞子の分離が可能であった。担子胞子分離株は,野生株と形態に大きな差異が認められるものと,認められないものに分かれる傾向が見られた。初年度は,まず,形態に大きな差異の認められない子孫株同士の交配試験および子実体形成試験を試みた。その結果,交配により生じたと考えられるクランプは認められたものの,子実体形成は一切認められなかった。以上のことから,子実体過剰形成の形質は,野生株と生育に差異が認められる担子胞子に遺伝しているものと示唆された。また、本年度は,ショウロに対する遺伝子導入系の開発も試みた。遺伝子導入系のポジティブコントロールとしては,腐生性のエノキタケを用いた。手法は菌類の遺伝子組換えに一般的に用いられるプロトプラストPEG法およびアグロバクテリウム法を用いた。エノキタケについては,両手法でハイグロマイシン耐性遺伝子の導入に成功したが,ショウロでは変異株は得られなかった。本年度は,ハイグロマイシン耐性遺伝子のプロモータとして担子菌類Cryptococcus neoformansのActin遺伝子のプロモータを用いたが,これを日本産ショウロのネイティブなプロモータに差し替える必要があると考えられた。

松茸和Choro等菌根真菌一般极难人工培养，认为没有菌根共生就无法形成子实体。在这项研究中，我们关注的是一种特殊的日本 Choro 菌株，即使在培养基上也能形成子实体。 Rr6f菌株是日本紫颂子实体过多的菌株，在琼脂培养基上形成子实体，并且可以分离担子孢子。担孢子分离株有被分为形态与野生型有较大差异的和没有形态差异的趋势。第一年，我们首先尝试了后代菌株之间的杂交育种试验和子实体形成试验，结果显示形态上没有重大差异。结果，虽然观察到了被认为是由杂交引起的夹子，但没有观察到子实体形成。综上所述，表明子实体过度形成的性状是由担孢子遗传的，其生长与野生型不同。今年，我们还尝试为 Choro 开发基因转移系统。使用腐生金针菇作为基因导入系统的阳性对照。采用了真菌遗传改造常用的原生质体PEG法和农杆菌法。对于金针菇，我们使用两种方法都成功导入了潮霉素抗性基因，但没有获得金针菇突变株。今年，我们使用担子菌——新型隐球菌的肌动蛋白基因启动子作为潮霉素抗性基因的启动子，但认为有必要将其替换为日本西瓜的天然启动子。