眼窩下神経結紮モデルを用いた、神経障害性疼痛に対するNetrin-1の関与の検討

使用眶下神经结扎模型检查 Netrin-1 在神经性疼痛中的作用

基本信息

批准号：
21K21064
负责人：
本城有華
金额：
$ 1万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K21064/
关键词：
神経障害性疼痛 Netrin-1

项目摘要

まずSDラットを導入後にラットを乗せる台や時間等を考慮しながら1週間かけて環境に馴化させた。その後vonFreyフィラメントを用いてラットのWisker padに刺激を与え、それに対する行動を評価した。１）眼窩下神経結紮後７，１４日にvonFrey フィラメントを用いて行動評価を行い、疼痛閾値の変化を検討した。７，１４日目に結紮前と比較して、疼痛閾値は低下しており、サンプル数を増やすことでその差はより顕著になると考えられた。今後、７，１４，２１日において行動評価を行い、そのサンプル数を増やして解析する。２）眼窩下神経結紮後14日目に疼痛閾値が低下した個体を灌流固定し、免疫組織学的検討を行った。一次抗体として抗Netrin-1抗体（NB100-1605）、抗NeuN抗体（MAB377）を使用した。三叉神経脊髄路核尾側亜核（Vc）および上部頚髄（C1-C2）において、Netrin-1は発現を認めた。Netrin-1は神経結紮群（CCI群）と擬似オペ群（Sham群）とで比較するとCCI群でより発現が増加していた。その発現細胞としては神経細胞にも発現を認めたが、それ以外の細胞にも発現していると考えられ、今後ミクログリアやアストロサイトでの発現を解析するとともに、サンプル数も増やして明らかな差があるかどうかを解析する。現在得られた結果からはまだ明らかな関与は断言できないが、サンプル数を増やし、解析を進めることでNetrin-1が眼窩下神経結紮による神経障害性疼痛に関与の可能性をを明らかにできるのではないかと考えられる。

首先，引入SD大鼠后，我们让它们在一周的时间内适应环境，考虑到它们所放置的平台、时间等。然后，我们使用冯弗雷细丝刺激大鼠的晶须垫并评估它们的行为。 1)在眶下神经结扎后第7天和第14天使用冯弗雷丝进行行为评估，并检查疼痛阈值的变化。第7天和第14天，疼痛阈值低于结扎前，并且认为随着样本数量的增加，差异会变得更加明显。今后将在第7、14、21天进行行为评估，并增加样本数量进行分析。 2)对眶下神经结扎后14天痛阈下降的个体进行灌注固定并进行免疫组织学检查。使用抗Netrin-1抗体(NB100-1605)和抗NeuN抗体(MAB377)作为一抗。 Netrin-1 在三叉神经脊髓束核 (Vc) 和上颈脊髓 (C1-C2) 的尾亚核中表达。比较神经结扎组（CCI组）和假手术组（Sham组），CCI组Netrin-1的表达增加更多。在神经细胞中观察到表达，但认为在其他细胞中也表达。将来，我们将分析小胶质细胞和星形胶质细胞中的表达，并增加样本数量以鉴定是否存在明显差异。虽然我们还不能断定Netrin-1与眶下神经结扎引起的神经病理性疼痛有关，但增加样本数量并进行分析可能会揭示Netrin-1与眶下神经结扎引起的神经病理性疼痛有关的可能性。据认为，情况确实如此。