オキシリピンが早産児における慢性肺疾患に与える影響

氧脂素对早产儿慢性肺病的影响

基本信息

批准号：
21K20880
负责人：
菅沼広樹
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20880/
关键词：
オキシリピン慢性肺疾患脂質栄養早産児脂肪酸新生児

项目摘要

申請者らは、アデレード大学のProf Robert Gibsonらが開発した乾燥濾紙血（PUFAcoat card）法を用いることで少量の血液(約20μL)を使用し、オキシリピンを網羅的に測定できる技術を使用し研究を行ってきた。しかし、本研究のような肺組織を用いた測定には適応できなかったため、新たな測定方法の導入を行った。ラットの肺を約100mg採取し、液体窒素で極低温に凍結し、ステンレス片とともに振盪することで凍結粉砕を行った。粉砕した試料にメタノールを加え撹拌することで粗抽出をおこなった。試料の濃縮と清浄化を目的に固相抽出（solid-phase extraction）カートリッジによる再抽出をおこなった。再抽出した試料はLC-MS/MSを使用しオキシリピンを網羅的に解析した。今回の測定方法では、リノール酸由来8種類、アラキドン酸由来42種類、αリノレイン酸由来2種類、エイコサペンタエン酸由来8種類、DHA由来30種類のオキシリピンが一斉に測定可能となった。また、固相抽出を行うことにより肺組織に含まれるオキシリピンを濃縮することにより、極微量のオキシリピンも測定可能となった。慢性肺疾患モデルとして高濃度酸素負荷ラットの作製を行った。コントロールとして一般餌を使用したラットの肺組織中のオキシリピンを測定中である。

申请人使用阿德莱德大学罗伯特·吉布森教授及其同事开发的干燥滤纸血液（PUFA涂层卡）方法，使用少量血液（约20μL）全面测量氧脂素。去过那里。然而，这种方法不能应用于本研究中使用肺组织的测量，因此引入了一种新的测量方法。收集约100mg大鼠肺，在液氮中冷冻至极低温度，并用一块不锈钢振摇冷冻粉碎。通过向粉碎的样品中添加甲醇并搅拌来进行粗提取。使用固相萃取柱进行再萃取以浓缩和清洁样品。使用 LC-MS/MS 对重新提取的样品中的氧脂质进行全面分析。通过该测定方法，可以同时测定来自亚油酸的8种、来自花生四烯酸的42种、来自α-亚油酸的2种、来自二十碳五烯酸的8种、来自DHA的30种。另外，通过固相萃取浓缩肺组织中所含的氧脂质，可以测定微量的氧脂质。我们创建了接受高浓度氧负荷的大鼠作为慢性肺病模型。作为对照，我们目前正在测量喂常规食物的大鼠肺组织中的氧脂素。