免疫チェックポイント分子B7-H3とオートファジーの共制御による尿路上皮癌の抑制

通过免疫检查点分子 B7-H3 和自噬的共同调节抑制尿路上皮癌

基本信息

批准号：
21K20783
负责人：
小山雄一
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Azabu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度に得られた実験結果は次の通り（①～⑤）である。①抗B7-H3抗体存在下におけるマウス脾内白血球による尿路上皮癌細胞株の傷害率を解析した。抗B7-H3抗体の添加による明らかな細胞傷害率の変化はみられなかった。②尿路上皮癌細胞株におけるPD-L1発現をフローサイトメトリーで確認した後、抗PD-L1抗体存在下におけるマウス脾内白血球による尿路上皮癌細胞の傷害率を解析した。抗PD-L1抗体添加による明らかな細胞傷害率の変化はみられなかった。③マウス脾内細胞を用いた実験では免疫チェックポイント抗体添加による細胞傷害率の増強がみられなかったため、マウス脾臓よりNK細胞を磁気分離して実験に用いることを計画した。マウス脾臓から磁器分離した細胞をIL-2存在下で培養し、抗CD3抗体および抗CD49b抗体を用いてNK細胞の割合をフローサイトメトリーで解析したところ、8割程度のCD3陰性・CD49b陽性細胞がみられた。④マウス脾内白血球と磁気分離したNK細胞を用いて細胞傷害率を比較した。脾内白血球群と比較し、NK細胞群では2.5倍程度高い細胞傷害率を示した。⑤各種免疫チェックポイント抗体がNK細胞による尿路上皮癌細胞の傷害に及ぼす影響について解析した。抗PD-L1抗体、抗B7-H3抗体、抗NKG2A抗体、抗CD96抗体、抗PD-1抗体を用いて検討したが、いずれの抗体も細胞傷害率に明らかな変化を及ぼさなかった。現在、NK細胞による細胞傷害率を増強させるための各種条件について検討を重ねている。

相关年份的实验结果如下（①至⑤）。 ①我们分析了抗B7-H3抗体存在下小鼠脾内白细胞对尿路上皮癌细胞系的损伤率。由于添加抗B7-H3抗体，没有观察到细胞毒性率的明显变化。 ②通过流式细胞术确认尿路上皮癌细胞系中PD-L1的表达，我们分析了抗PD-L1抗体存在下小鼠脾内白细胞对尿路上皮癌细胞的损伤率。由于添加抗PD-L1抗体，没有观察到细胞毒性率的明显变化。 ③在使用小鼠脾脏细胞的实验中，没有观察到由于添加免疫检查点抗体而导致细胞毒性率的增强，因此我们计划从小鼠脾脏中磁力分离NK细胞并将其用于实验。在IL-2存在下培养从小鼠脾脏中磁力分离的细胞，并使用抗CD3和抗CD49b抗体通过流式细胞术分析NK细胞的百分比，大约80%是CD3阴性和CD49b阳性细胞被看见了。 ④ 我们比较了小鼠脾内白细胞和磁力分离的 NK 细胞的细胞毒性率。与脾内白细胞组相比，NK细胞组的细胞毒性率高出约2.5倍。 ⑤我们分析了各种免疫检查点抗体对NK细胞损伤尿路上皮癌细胞的影响。我们使用抗PD-L1抗体、抗B7-H3抗体、抗NKG2A抗体、抗CD96抗体和抗PD-1抗体进行研究，但没有一种抗体的细胞毒性率有任何明显变化。我们目前正在研究各种条件来增强 NK 细胞的细胞毒性率。