CD109を応用した口腔扁平上皮癌早期発見のための新規診断マーカーの探究

使用 CD109 探索用于早期检测口腔鳞状细胞癌的新诊断标记物

• 批准号: 21890103
• 负责人: 萩原 純孝
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890103/
• 关键词: CD109; TGF-βシグナル; 細胞増殖; 扁平上皮癌

1.CD109高発現株の樹立とその形質についての検討FLAG付加型ヒトCD109遺伝子をHEK293細胞に導入して高発現株をコントロール株とともに樹立した。細胞増殖能をWST-1法にて評価したところ細胞増殖はCD109高発現293細胞において有意に亢進していた。浸潤能については再現性もって有意な相違を示すことができなかった。2.CD109相互作用タンパク質の同定樹立したCD109高発現株から細胞溶解液を精製し、抗FLAG抗体を用いた免疫沈降法を行った。免疫沈降産物をアクリルアミドゲル電気泳動で分離後、銀染色を行ったところ80kDa以上の高分子領域に共沈タンパク質と思われる複数のバンドを確認した。トリプシン消化法でLC/MS質量分析を行ったが有力なペプチドを同定することができなかった。肺扁平上皮癌細胞株SK-MES-1で同様の実験を行ったところTGF-β前駆タンパクであるLTBP-1が同定された。3.CD109高発現が及ぼす遺伝子発現変化の検討293-CD109高発現株およびコントロール株からメッセンジャーRNAを抽出した。当初は同検体をDNAマイクロアレイ解析へ外注予定であったが、金銭的な理由から来年度へ先送りすることとした。4.シグナル伝達変化の検討樹立したCD109高発現株およびコントロール株をTGF-β1で刺激し、下流分子Smadのリン酸化をウェスタンブロッティングで評価したところ、CD109の高発現がSmadのリン酸化を有意に減弱させ、さらに下流のP21の産生誘導まで抑制していることが分かった。細胞増殖が亢進することを裏付ける結果が得られた。同様にEGFの刺激実験を行ったが、下流分子(AKT/MAPK)のシグナルに明らかな変化は認められなかった。

1。建立高度表达的CD109菌株及其特征，将旗帜添加的人CD109基因引入了HEK293细胞中，以与对照菌株一起建立高度表达的菌株。使用WST-1方法评估细胞增殖能力，并发现在CD109高表达的293个细胞中细胞增殖显着增加。可再现的入侵能力中没有显着差异。 2。鉴定CD109相互作用蛋白。从CD109高表达菌株中纯化细胞裂解物，并使用抗FLAG抗体进行免疫沉淀。通过丙烯酰胺凝胶电泳分离免疫沉淀后，进行了银色染色，以确认在80 kDa或更高的聚合物区域中似乎是沉淀蛋白的多个带。尽管使用胰蛋白酶消化进行了LC/MS质谱法，但无法鉴定出有效的肽。在鳞状细胞癌肺细胞系SK-MES-1上进行了类似的实验，并鉴定出TGF-β前体蛋白LTBP-1。 3。检查由高CD109表达引起的基因表达变化。从293-CD109高表达应变和对照应变中提取信使RNA。最初，该样本计划将其外包给DNA微阵列分析，但出于经济原因，它已决定将其推迟到明年。 4。调查信号变化。用TGF-β1刺激了确定的CD109高表达菌株和对照菌株，并通过Western blotting评估了下游分子SMAD的磷酸化。发现CD109的高表达显着减弱了SMAD磷酸化，并进一步抑制了下游P21产生的诱导。获得结果以支持增加的细胞增殖。同样，进行了EGF刺激实验，但在下游分子（AKT/MAPK）的信号中未观察到明显的变化。

项目成果

口腔癌におけるCD109の発現と生物学的機能の解析

CD109在口腔癌中的表达及生物学功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: S Hagiwara;Y Murakumo;S Mii;T Shigetomi;N Yamamoto;H Furue;M Ueda;M Takahashi;萩原純孝
• 通讯作者: 萩原純孝

Processing of CD109 by furin and its role in the regulation of TGF-β signaling

• DOI: 10.1038/onc.2009.506
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Hagiwara, S.;Murakumo, Y.;Takahashi, M.
• 通讯作者: Takahashi, M.