植物におけるリボソームRNA合成装置の同定と機能解析

植物核糖体RNA合成机制的鉴定和功能分析

• 批准号: 21870034
• 负责人: 今村 壮輔
• 金额: $ 1.76万
• 依托单位: Chuo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21870034/
• 关键词: 遺伝子発現調節; rRNA; 環境応答; 転写; RNAポリメラーゼI

本研究では、植物の核内においてrRNA合成を行う、RNAポリメラーゼI(Pol I)に加えて、Pol Iと協調的に機能する転写因子群を同定・機能解析する事により、植物におけるrRNA合成制御機構を明らかにする事を目的にしており、以下2項目についての研究を行った。1. rRNA合成反応におけるTORの役割(1) TORとTBP, Rrn3との結合の検証:まず、クロマチン免疫沈降解析により、TBPとRrn3が、rDNAプロモーター領域に特異的に結合していること、つまり、rRNA合成に寄与する因子である事を明らかにした。その後、pBrpと同様に、TORと複合体を形成するか否かについて、TORに対する抗体を用いた免疫沈降実験にて解析した。その結果、TBPとRrn3は、pBrpとは異なり、TORと複合体を形成しない事が明らかになった。(2) TOR-pBrp結合量と新規合成rRNA合成量との関係:TORとpBrpの結合量の変化と、新規合成rRNA量との相関関係をRun-on解析法にて調査した。その結果、両者の間に正の相関関係が認められた。(3) 細胞内局在解析:免疫染色法による局在解析を行ったが、バックグラウンドが高いため、細胞固定法や、染色方法などの最適化を行った。2. 植物Pol Iの構成因子とPol Iと協調して機能する転写因子の同定と機能解析(1) Pol I複合体の精製:Pol Iのサブユニットにタグを付加する試みを行ったが、現時点までに形質転換体の取得に成功していない。(2) Pol Iと協調的に機能する転写因子群の同定:酵母ツーハイブリット法にて、Pol Iと結合する因子の同定を試みた。その結果、7個の遺伝子の同定に成功した。

在这项研究中，目的是通过鉴定和功能分析与Pol I合作，除RNA聚合酶I（pol I）之外，阐明和功能分析植物中RRNA合成的机制，这些转录因子（POL I）合成了植物核中的RRNA，并进行了以下两项研究。 1。TOR在RRNA合成反应中的作用（1）验证TOR和TBP和RRN3之间的结合：首先，染色质免疫沉淀分析表明，TBP和RRN3特异性与RDNA启动子区域特异性结合，即对RRNA合成有助于RRNA的因素。然后，与PBRP相似，是否使用TOR抗体进行免疫沉淀实验分析了由TOR形成的复合物。结果表明，与PBRP不同，TBP和RRN3不会与TOR形成复合物。 （2）使用跑步分析方法研究了TOR-PBRP结合量与新合成rRNA的量与新合成rRNA的量与新合成rRNA之间的相关性与新合成RRNA的量之间的关系。结果，两者之间发现了正相关。 （3）细胞内定位分析：使用免疫染色进行定位分析，但由于背景高，细胞固定和染色方法优化了。 2。识别和功能分析，与植物pol I和pol I和pol I（1）纯化pol I复合物的功能的转录因子：试图对Pol I子单位进行标记，但为此，转化剂并未成功获取。 （2）鉴定与Pol I一起起作用的转录因子：我们尝试使用酵母两种杂交方法来识别pol I的因素。结果，成功鉴定出七个基因。

项目成果

光合成微生物における環境変化に応じた転写制御に関する研究

光合微生物响应环境变化的转录调控研究

• 发表时间: 2010
• 作者: Mora;T.;Yu;H.;Sowa;Y. & Wingreen;N.;Nakada S;今村壮輔
• 通讯作者: 今村壮輔

単細胞紅藻シゾンにおける窒素代謝:窒素同化遺伝子群を制御する転写因子の同定とそれを介した転写制御機構の解析

单细胞红藻Schison的氮代谢：控制氮同化基因的转录因子的鉴定及其介导的转录控制机制分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Mora;T.;今村壮輔
• 通讯作者: 今村壮輔

植物で明らかにされたリボソームRNA合成酵素の進化の道筋-植物特異的なTFIIB型基本転写因子pBrpの機能解析-

揭示植物核糖体RNA合成酶的进化路径 - 植物特有的TFIB型基本转录因子pBrp的功能分析 -

• 发表时间: 2009
• 期刊: 化学と生物 Vol.47,No.11
• 作者: 今村壮輔;華岡光正;田中寛
• 通讯作者: 田中寛

R2R3-type MYB transcription factor, CmMYB1, is a central nitrogen assimilation regulator in Cyanidioschyzon merolae

• DOI: 10.1073/pnas.0902790106
• 发表时间: 2009-07-28
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Imamura, Sousuke;Kanesaki, Yu;Tanaka, Kan
• 通讯作者: Tanaka, Kan