Integrated analysis of androgen signaling in skeletal muscles.

骨骼肌中雄激素信号的综合分析。

基本信息

批准号：
18H06439
负责人：
酒井大史
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

(1) 骨格筋幹細胞特異的AR遺伝子欠損マウスの作出ならびに静止期の骨格筋の評価　骨格筋幹細胞特異的にタモキシフェン誘導型のCreを発現するマウス（Pax7Cre-ERT2）と、AR floxマウス（ARf/y）との交配により、骨格筋幹細胞特異的AR欠損マウス（Pax7Cre-ERT2;ARf/y）を作出した。このマウスの8週齢時に、タモキシフェンを腹腔内投与することで、AR遺伝子欠損を誘導した。後肢の各種筋を採取し、組織学的解析を実施した。その結果、静止期における骨格筋幹細胞でARを欠損させても、大きな表現型はみられなかった。(2) Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスにおける骨格筋幹細胞の単離　骨格筋幹細胞に特異的な表面マーカを染色することで、セルソータをもちいて、Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスから骨格筋幹細胞を単離した。単離した細胞でARの発現を確認したところ、骨格筋細胞特異的にARの発現が減少していることを確認した。(3) Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスにおける筋損傷ならびに再生期の骨格筋の評価　上記のマウスに対して、ヘビ毒素ファミリーの一つでPKC特異的阻害作用を有するCardiotoxinをもちいて、前脛骨筋（Tibialis anterior, TA）に筋損傷を誘導し、骨格筋の再生能を評価した。損傷後、5・14・21日後にTAを回収し、筋重量の測定ならびに肉眼的変化を観察後、凍結切片を作成した。凍結切片では、組織学的ならびに免疫組織学的解析を行った。その結果、コントロールマウスであるPax7Cre-ERT2においても、Pax7発現細胞数の減少という表現型がみられた。

(1) 创建骨骼肌干细胞特异性 AR 基因缺陷小鼠，并评估静息期 A 小鼠的骨骼肌，该小鼠以骨骼肌干细胞特异性方式表达他莫昔芬诱导的 Cre (Pax7Cre-ERT2) 和 AR flox 小鼠（ARf/ 骨骼肌干细胞特异性 AR 缺陷小鼠（Pax7Cre-ERT2；ARf/y）是通过与 y 杂交产生的）。当小鼠8周大时，通过腹腔注射他莫昔芬诱导AR基因缺失。收集后肢的各种肌肉并进行组织学分析。结果，即使在静息期骨骼肌干细胞中删除 AR，也没有观察到显着的表型。 (2)从Pax7Cre-ERT2；ARf/y小鼠中分离骨骼肌干细胞通过对骨骼肌干细胞特异性的表面标记进行染色，使用细胞分选仪从Pax7Cre-ERT2；ARf/y小鼠中分离骨骼肌干细胞。孤立。当在分离的细胞中确认AR表达时，证实AR表达在骨骼肌细胞中特异性降低。 (3) Pax7Cre-ERT2;ARf/y小鼠的肌肉损伤和再生骨骼肌的评价用心脏毒素治疗上述小鼠，心脏毒素是蛇毒素家族的成员，具有PKC特异性抑制作用，对肌肉损伤进行了评估。在肌肉（胫骨前肌，TA）中诱导，并评估骨骼肌的再生能力。损伤后5、14、21天采集TA，测量肌肉重量，观察宏观变化，并制备冰冻切片。对冰冻切片进行组织学和免疫组织学分析。结果，对照小鼠Pax7Cre-ERT2也表现出表达Pax7的细胞数量减少的表型。