悪性グリオーマ浸潤リンパ球に於けるT細胞抗原レセプターの分子生物学的解析

浸润性恶性胶质瘤淋巴细胞T细胞抗原受体的分子生物学分析

基本信息

批准号：
06807113
负责人：
新田泰三
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者は悪性グリオーマに於けるTIL TCR repertoireをRT-PCR法により検索し、limited heterogenityとVα7,とVβ13.1のpredominant usageを立証した(Nitta T,Science:249:672,'90,Ebato M,Immunol Lett 39:53'94)。本実験ではこれらのサブクローンのV-J-D-Cの塩基配列を検索することでTILの抗原特異性を検討した。悪性グリオーマ12症例より抽出、合成したcDNAをVDJC領域のPCR増幅を行い、酸素処理後、Bluescriptvector、TG1,XL1-bluをcompetentcellとしてtransformationを施行した。得られたコロニーからアルカリ法によりplasmidを抽出、dideoxy法によりシークエンスを行った。Vβ13.1+TILのNDβ領域で、YRLPWGTSDSの共通配列が見られた。PBL由来Vβ13.1+T細胞に於けるTCRではTILで認められた共通配列を示す例は少なかった。Vβ3,Vβ5.1ではJC領域のみに共通配列があるもTILのVβ13.1のJC領域とも異なっていた。以上の所見よりグリオーマ特異的T細胞であることが強く示唆された。異なる悪性グリオーマ患者間に、共通塩基構造を有するT細胞が存在することは、腫瘍内におけるTILのclonalityが明かになるとともにグリオーマ特異抗原の存在が考えられる。特異抗原に対するキラーT細胞を誘導するか、もしくはこの共通塩基部のcDNA各グリオーマ患者の非刺激Tリンパ球に遺伝子導入して自己腫瘍細胞に特異的キラー活性を誘導することで、悪性グリオーマに対する特異的免疫遺伝子治療が可能となると思われる。

申请人通过 RT-PCR 搜索了恶性神经胶质瘤中的 TIL TCR 库，并证明了 Vα7 和 Vβ13.1 的有限异质性和主要用途（Nitta T，Science：249：672，'90，Ebato M，Immunol Lett 39：53'94 ）。在本实验中，我们通过搜索这些亚克隆的V-J-D-C核苷酸序列来检查TIL的抗原特异性。从12例恶性胶质瘤病例中提取合成的cDNA，对VDJC区进行PCR扩增，氧处理后，使用Bluescriptvector、TG1和XL1-blu作为感受态细胞进行转化。通过碱法从获得的菌落中提取质粒，并通过双脱氧法测序。在Vβ13.1+TIL的NDβ区域中发现了YRLPWGTSDS的共同序列。 PBL 衍生的 Vβ13.1+ T 细胞中很少有 TCR 的例子，显示在 TIL 中观察到的共同序列。 Vβ3和Vβ5.1仅在JC区有共同序列，但也与TIL Vβ13.1的JC区不同。上述发现强烈表明这些是神经胶质瘤特异性 T 细胞。不同恶性神经胶质瘤患者中存在具有共同基础结构的 T 细胞，揭示了肿瘤内 TIL 的克隆性，并表明存在神经胶质瘤特异性抗原。通过诱导针对特定抗原的杀伤性T细胞，或者通过将这个共同碱基区域的cDNA引入每个神经胶质瘤患者的未刺激的T淋巴细胞中并在自体肿瘤细胞中诱导特异性杀伤活性，我们相信可以诱导针对恶性神经胶质瘤的特异性杀伤活性。靶向免疫基因治疗将成为可能。