悪性グリオーマ浸潤リンパ球に於けるT細胞抗原レセプターの分子生物学的解析

浸润性恶性胶质瘤淋巴细胞T细胞抗原受体的分子生物学分析

• 批准号: 06807113
• 负责人: 新田 泰三
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06807113/
• 关键词: 悪性グリオーマ; 腫瘍浸潤リンパ球; T細胞抗原レセプター; 遺伝子治療; 悪性グリオーマ; 腫瘍浸潤リンパ球; T細胞抗原レセプター; 遺伝子治療

申請者は悪性グリオーマに於けるTIL TCR repertoireをRT-PCR法により検索し、limited heterogenityとVα7,とVβ13.1のpredominant usageを立証した(Nitta T,Science:249:672,'90,Ebato M,Immunol Lett 39:53'94)。本実験ではこれらのサブクローンのV-J-D-Cの塩基配列を検索することでTILの抗原特異性を検討した。悪性グリオーマ12症例より抽出、合成したcDNAをVDJC領域のPCR増幅を行い、酸素処理後、Bluescriptvector、TG1,XL1-bluをcompetentcellとしてtransformationを施行した。得られたコロニーからアルカリ法によりplasmidを抽出、dideoxy法によりシークエンスを行った。Vβ13.1+TILのNDβ領域で、YRLPWGTSDSの共通配列が見られた。PBL由来Vβ13.1+T細胞に於けるTCRではTILで認められた共通配列を示す例は少なかった。Vβ3,Vβ5.1ではJC領域のみに共通配列があるもTILのVβ13.1のJC領域とも異なっていた。以上の所見よりグリオーマ特異的T細胞であることが強く示唆された。異なる悪性グリオーマ患者間に、共通塩基構造を有するT細胞が存在することは、腫瘍内におけるTILのclonalityが明かになるとともにグリオーマ特異抗原の存在が考えられる。特異抗原に対するキラーT細胞を誘導するか、もしくはこの共通塩基部のcDNA各グリオーマ患者の非刺激Tリンパ球に遺伝子導入して自己腫瘍細胞に特異的キラー活性を誘導することで、悪性グリオーマに対する特異的免疫遺伝子治療が可能となると思われる。

申请人通过RT-PCR方法在恶性神经胶质瘤中搜索了TIL TCR曲目，并证明了有限的异源性和Vα7和Vβ13.1的主要用法（Nitta T，Science：249：672，'90，'90，'90，eBato M，eBato M，Immunol Lett 39：53：53：53'94）。在此实验中，通过搜索这些亚克隆的V-J-D-C的基本序列研究了TIL的抗原特异性。从12例恶性神经胶质瘤中提取并合成的cDNA在VDJC区域进行了PCR，在氧处理后，使用BluescriptVector，TG1，XL1-Blu作为compactcell进行了所得转化。通过碱方法从获得的菌落中提取质粒，并通过二氧化法测序。在Vβ13.1+TIL的NDβ区域中发现了YRLPWGTSD的共识序列。在PBL衍生的Vβ13.1+ T细胞中的TCR中，很少有病例显示在TIL中观察到的共识序列。尽管仅在Vβ3和Vβ5.1中发现JC区域，但JC区域与TIL中的Vβ13.1的JC区不同。上面的发现强烈表明它是胶质瘤特异性的T细胞。不同恶性神经胶质瘤患者之间具有共同碱基结构的T细胞的存在表明肿瘤内的克隆性，并且可能存在胶质瘤特异性抗原。人们认为，可以通过诱导杀伤性T细胞针对特定抗原的特异性免疫基因治疗来实现恶性神经胶质瘤，或通过将基因转导至该常见碱中的cDNA的未刺激的T淋巴细胞中，以诱导自体肿瘤细胞中的特定杀伤活性。