Culture method of human renal collecting duct cells and identification of alpha 2 adrenergic receptor

人肾集合管细胞的培养方法及α2肾上腺素受体的鉴定

• 批准号: 04670549
• 负责人: YASUDA Gen
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670549/
• 关键词: Adrenergic alpha2 receptor; Papillary collecting duct; Rauwolscine; Prazosin; Oxymetazoline; オキシメタゾリン; α_2受容体; 交感神経α受容体; 腎α_2受容体; CAMP; PTH受容体; 交感神経の受容体

研究によって得られた新たな知見等の成果ヒト腎髄質、乳頭部の集合管上皮細胞の選択的分離培養で以下のことが判明した。1、分離培養は可能であるがラット腎集合管上皮細胞と比べ、増殖力は弱く、受容体解析、サイクリックAMP測定等に十分な細胞を確保することは困難であった。2、継代培養による増殖では母細胞と異なるファイブロブラストの出現が多く、継代培養細胞に母細胞と同一性を見い出せなかった。3、新鮮ヒト腎皮質、髄質はサイクリックAMP測定には不適当であったが、受容体解析は可能であった。この結果、ヒト腎皮質、髄質粗膜分画で交感神経alpha2受容体に特異的拮抗作用を持つ^3H-ロウオルシンの結合をみた。この結合は皮髄質共に迅速で飽和性を示し、非特異的alpha受容体拮抗薬フェントラミンで分離された。Scatchard解析で結合は直線性を示し、Kdは5.6nM(皮質)、5.1nM(髄質)、Bmaxは33.4fmol/mg protein(皮質)、63fmol/mg protein(髄質)であった。拮抗阻害作用を検討し、アンタゴニスト群では、皮髄質共に、ロウオルシン、ヨヒンビン、WB4101、BAM1303、オキシメタゾリン、SKF104078、プラゾシン、コリナンチンの順に親和性を示すことが判明した。以上の結果から、ヒト腎皮質髄質共に、交感神経alpha2受容体のサブタイプalpha2A受容体の存在を示す結果が得られた。この結果は他研究所で報告のある遺伝子ハイブリダイゼーションによるヒト腎alpha2C受容体の存在とは異なるものであった。まったく違った方法による結果であり、今後の検討が必要である。展開交感神経alpha受容体はサブタイプ1と2に分けられ、さらにそのサブタイプA、B、Cが証明されつつある。これら究極の特異的分類はそれぞれの受容体に極めて特異的な拮抗薬の開発を可能とさせ、その薬物の主作用を限定し、副作用を少なくさせる可能性を示すものとみられる。

通过研究获得的新发现结果通过选择性分离和培养人肾髓质和乳头中的集合管上皮细胞，发现了以下发现。 1. 虽然可以分离培养，但其增殖能力较大鼠肾集合管上皮细胞弱，难以获得足够的细胞用于受体分析、环AMP测定等。 2.传代时常出现与母细胞不同的成纤维细胞，且传代时未发现与母细胞同一性。 3.新鲜的人肾皮质和髓质不适合进行环AMP测量，但可以进行受体分析。结果，我们在人肾皮质和髓质粗膜部分中观察到^3H-roworscine的结合，其对交感α2受体具有特异性拮抗作用。这种结合在皮质髓质和髓质区域都是快速且可饱和的，并且可以通过非特异性 α 受体拮抗剂酚妥拉明来分离。 Scatchard 分析显示结合呈线性，Kd 为 5.6 nM（皮质）和 5.1 nM（髓质），Bmax 为 33.4 fmol/mg 蛋白质（皮质）和 63 fmol/mg 蛋白质（髓质）。发现拮抗剂组对皮质髓质皮质和髓质均具有亲和力，顺序为胡尔辛、育亨宾、WB4101、BAM1303、羟甲唑啉、SKF104078、哌唑嗪和科林南汀。上述结果表明，人肾皮质和髓质中均存在交感神经α2受体的α2A亚型。这一结果与其他实验室通过基因杂交报道的人肾α2C受体的存在不同。该结果是使用完全不同的方法获得的，需要进一步研究。扩展的交感神经α受体分为1亚型和2亚型，A、B、C亚型正在进一步论证中。这些最终的特异性分类有望使得为每种受体开发高度特异性的拮抗剂成为可能，从而限制药物的主要作用并可能减少副作用。

项目成果

Gen Yasuda, Satoshi Umemura and Masao Ishii: "The characterization of human renal alpha2A receptors" In progress.

Gen Yasuda、Satoshi Umemura 和 Masao Ishii：“人类肾 α2A 受体的表征”正在进行中。