微生物の生産するβ-1,3グルカナーゼに関すル研究

微生物产生β-1,3葡聚糖酶的研究

• 批准号: 04660108
• 负责人: 田中 啓達
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660108/
• 关键词: β-1,3 glucanase; ドメイン構造; 基質への吸着; ArthroBacter

Bacillus circulans WL-12はβ-1,3 gucan を基質として倍養すると、倍地中に多数のβ-1,3 glucanase を産生する。その内β-1,3 glucan の分解に最も重要と考えられる glucanase Al を大腸菌にクローン化し、塩基配列を決定した。複数のβ-1,3 glucanase の内われわれがA2 A3、A4と呼んでいる酵素はA1からタンパク質分解酵素の作用により生じたものと考えられた。市販のタンパク分解酵素トリプシン、キモトリプシン、パパインを作用させた所活性をもつA2、A3、A4と同じ分子量のものが得られた。N末端アミノ酸分析からこれらはA1から3つのドメインがつぎつぎ失われて生ずることが明になった。またA1には1つのタンパク分解酵素の作用を比較的受け難いドメインが存在し、その間に短かいタンパク分解酵素の作用を受け易いアミノ酸配列があると考えられた。N末端の3つのドメインは基質への吸着に重要であることが明らかになった。原核細胞のβ-1,3 glucanase をコードする遺伝子をクローン化し、塩基配列を決定したのはわれわれが初めてである。今回放線〓に近縁の Arthrobacter sq YCWD3のβ-1,3 glucanase I をコードする遺伝子 glcI(既に大阪大学産業技術研究所土井博士によってクローン化されたもの)の塩基配列の決定とアミノ酸配列の推定を行った。その結果548aaをコードしている1647bqのORFを含んでいることが判った。本酵素と Bacillus circulans WL -12のglucanase AIと間にはアミノ酸配列の相同性は見付からなかった。Oerskovia xanthinoelytica のβ1,3glucanaseとは全域に亙って、またcastor bean の aglutinin や siun のC末端付辺で類似性か見付かった。

马戏团杆菌WL-12与β-1,3 Gucan作为底物加倍，并在加倍中产生许多β-1,3葡萄糖酶。其中，葡萄糖酶Al被认为是β-1,3葡萄糖降解最重要的，它被克隆到大肠杆菌中，并确定碱序列。在多个β-1,3葡萄糖酶中，由于蛋白水解酶的作用，我们称为A2，A3和A4的酶是由A1产生的。与A2，A3和A4相同的分子量，在获得胰蛋白酶，辣椒蛋白蛋白酶和木瓜蛋白酶时具有活性。 N末端氨基酸分析表明，这是由于三个结构域从A1中彼此丢失的。人们还认为，A1的结构域对单个蛋白水解酶的作用相对不可避免，并且它们之间有一个氨基酸序列，它易于短蛋白水解酶的作用。三个N末端结构域已被证明对于吸附到底物很重要。这是我们第一次克隆并确定核细胞中编码β-1,3葡萄糖酶的基因的碱基序列。这次，我们确定了基础序列并估算了基因GLCI的氨基酸序列（大阪大学工业技术研究所Doi已经克隆了基因序列），该基因序列编码了Arthrobacter SQ YCWD3的β-1,3葡萄糖酶I，该葡萄糖ICWD3的β-1,3葡萄糖酶I，密切相关。结果表明，它包含编码548AA的1647BQ的ORF。在这种酶和马戏团WL-12杆菌的葡萄糖酶AI之间未发现氨基酸序列同源性。我们发现与Xanthinoelytica的Oerskovia的β1,3gucanase和蓖麻豆的C末端边缘相似。