免疫組織化学的手法によるプリオン蛋白の迅速検出法並びに検出感度に関する研究

免疫组化法快速检测朊病毒蛋白的方法及检测灵敏度研究

基本信息

批准号：
14656118
负责人：
古岡秀文
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656118/
关键词：
プリオン免疫組織化学抗体抗原賦活化法エピトープ

项目摘要

(1)プリオン蛋白の免疫組織化学的検出感度に関する研究昨年度までに開発した免疫組織化学的高感度法とWB法の感度の比較を行った.スクレイピー帯広株脳内接種マウスを用いて経時的なプリオン蛋白の検出により比較を行った.WB法では30日目で脾臓に,60〜90日目に中枢神経系に異常プリオン蛋白が検出できた.一方,免疫組織化学的には脾臓は90日目,中枢神経系では120日目に検出可能であった.WB法ではマウス脾臓全量からの検出であるのに対して,免疫組織化学では約5μmの組織切片を使うことから単純な感度比較はできないが,免疫組織化学的方法は検出感度の点ではWB法に比較して劣ることが明らかになった.定量的な解析は現在実施中である.(2)パネル抗体による免疫組織化学コアエピトープに関する研究市販されている抗体を含め,これまでに開発された17種類の抗体を用いて,抗体の種特異性について,抗体エピトープと動物種間のアミノ酸配列との関連から検討した.動物種のアミノ酸配列と抗体エピトープの不一致が抗体の種特異性を規定する場合と規定しない場合があった.特異性を規定しない場合には,動物種間差でみられるいくつかのアミノ酸の違いは反応性を左右しない.しかしながら,アミノ酸一つの違いが動物種差としての特異性を規定する場合や,同じ領域を認識する抗体にも反応性に差がみられた.このことから,免疫組織化学的抗原抗体反応は抗体のエピトープ領域全てが関与するのではなく,限定されたコア領域に依存する可能性があることが推察された.

（1）对prion蛋白的免疫遗传检测敏感性的研究，比较去年开发的免疫化学化学高敏化方法。在第30天的脾脏和中枢神经系统上的60-90天。使用约5μm的组织片段，因此不可能进行简单的敏感性，但在包括检测敏感性方面，免疫组织化学方法与WB方法相比迄今为止，市场上使用了17种抗体来确定抗体表位与动物种类之间的氨基酸序列之间的抗体。抗体表位没有指定抗体的物种特异性，如果规定了特异性，则在动物物种中看到的一些氨基酸之间的差异是反应性的。动物物种的差异或识别同一区域的抗体在反应性上也不同。