生体膜グリケーション指標としてのアマドリ型アミノリン脂質の免疫定量

作为生物膜糖化指示剂的阿马多里型氨基磷脂的免疫定量

基本信息

批准号：
14656031
负责人：
宮澤陽夫
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

先に我々は、種々の疾患において、ヒトの血液、臓器、細胞を構成している膜リン脂質は過酸化反応を受け、生じた過酸化リン脂質(PCOOH)が細胞障害の原因になることを明らかにしてきた。例えば、糖尿病者の血漿PCOOH濃度は健常者の1.5倍に高く、PCOOH増加は糖化ヘモグロビン値(Hb_<A1C>)と正相関した。そこで、この膜脂質過酸化の原因物質を検索した結果、アミノリン脂質がグリケーションを受けて生成するアマドリ型の糖化脂質(Amadori-PE)を発見し同定することに成功した。とのAmadori-PE高純度品の合成に成功し、これが鉄イオンと共存すると活性酸素を産生し、脂質過酸化を誘発することを証明した。すなわち、糖尿病などの生体メイラード反応で細胞器官の膜リン脂質が糖化(グリケーション)されAmadori-PEに変換されると、これが原因になって膜脂質過酸化(PCOOH増加)が起こり、疾病の増悪化に関わるという従来全く知られていない可能性を明示した。糖化脂質と糖尿病の関わりをさらに明確にするためには、ヒト体内のAmadori-PE量を知る必要がある。しかしながら、ヒトの血液や組織などの臨床検体における糖化脂質の存在については世界的にも未だ確証されていない。そこで本研究では、Amadori-PEの免疫定量法の開発に取り組んだが、感度の問題からヒト試料の分析は困難であった。一方、本年度から、新型の高性能リニアイオントラップ型ハイブリッド質量分析装置(4000Q TRAP)が利用できるようになった。4000Q TRAPによる測定を試みた結果、ヒト血漿にAmadori-PEが存在することを世界ではじめて明らかにした。Amadori-PEは、成人健常者の血漿には少なく、糖尿病者とくに腎臓病を併発した透析患者の血漿から最も多く検出された。血漿のAmdori-PE濃度が高いと、過酸化リン脂質(PCOOH)濃度も高値となった。したがって、"高血糖状態に生じる脂質のグリケーション産物であるAmadori-PEは膜脂質過酸化反応を惹起することで糖尿病の増悪化につながる"という我々独自の仮説が裏付けられた。糖尿病の発症における生体内グリケーションの指標として、Amadori-PE分析の有効性が確証された。

我们首先发现，在各种疾病中，构成人体血液、器官和细胞的膜磷脂发生过氧化反应，产生的磷脂过氧化物（PCOOH）会导致细胞损伤。例如，糖尿病患者的血浆PCOOH浓度比健康受试者高1.5倍，且PCOOH的升高与糖化血红蛋白水平(Hb_<A1C>)呈正相关。通过寻找膜脂过氧化的致病因素，我们成功发现并鉴定了氨基磷脂糖化时产生的阿马多里型糖化脂质（Amadori-PE）。我们成功合成了高纯度的Amadori-PE产品，并证明当它与铁离子共存时，会产生活性氧并诱导脂质过氧化。换句话说，当细胞器官中的膜磷脂在生物美拉德反应（例如糖尿病中的反应）中被糖化并转化为 Amadori-PE 时，会导致膜脂质过氧化（PCOOH 增加），从而增加疾病的发生。这项研究揭示了一种以前未知的可能性。可能与恶化有关。为了进一步明确糖化脂质与糖尿病的关系，有必要了解人体内Amadori-PE的含量。然而，人类血液和组织等临床样本中糖化脂质的存在尚未在全球范围内得到证实。因此，在本研究中，我们致力于开发 Amadori-PE 的免疫测定方法，但由于灵敏度问题，很难分析人体样本。同时，从今年开始，新型高性能线性离子阱混合质谱仪（4000Q TRAP）已经上市。通过使用 4000Q TRAP 尝试测量，我们在世界上首次发现人血浆中存在 Amadori-PE。 Amadori-PE 在健康成年人的血浆中含量较低，但在糖尿病患者的血浆中最常见，尤其是患有肾病的透析患者。高血浆 Amdori-PE 浓度与高磷脂过氧化物 (PCOOH) 浓度相关。因此，我们最初的假设“Amadori-PE是高血糖条件下产生的脂质的糖化产物，会导致膜脂过氧化，从而导致糖尿病恶化”，得到了支持。 Amadori-PE 分析的有效性已被证实作为糖尿病发展中体内糖化的指标。