リステリア感染における一酸化窒素合成酵素発現の病原因子との関連およびその意義

李斯特菌感染中一氧化氮合酶表达与致病因素的关系及其意义

• 批准号: 07670302
• 负责人: 光山 正雄
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670302/
• 关键词: リステリア; 一酸化窒素; マクロファージ; サイトカイン; 病原因子; 感染防御

細胞内寄生性細菌であるリステリア(Listeria monocytogenes)の病原因子が感染宿主でのサイトカイン発現を規定している従来の我々の知見を基盤として、感染によりマウスのマクロファージに誘導される一酸化窒素合成酵素(iNOS)の発現とリステリアの病原因子の関連を解析し、以下の成果を得た。1.リステリン感染で誘導されるiNOSのmRNA発現は、病原性を有しマクロファージ内増殖能を示す菌に限られ、非病原菌株や死菌株では誘導されなかった。特に主要病原因子であるLLO(listeriolysin O)産生能が重要と考えられた。2.感染により脾で発現するサイトカインの種類とiNOS発現の関係をRT-PCRでしらべると、IFNγおよびIL-1αの発現がある場合に限ってiNOSの発現がみられた。またIFNγを抗体で中和するとiNOS発現は抑制された。抗asialoGM1抗体+補体で処理した脾細胞ではiNOS発現が消失することから、IFNγの産生はNK細胞に依存することが判明した。3.主要病原因子であるLLOを精製して脾細胞を刺激すると、リステリア生菌刺激と全く同様のパターンのサイトカイン発現がみられ、やはりIFNγに依存していた。この場合、IFNγ以外のサイトカイン、とくにIL-1α,TNFαの共同作用もiNOS産生には関与できることが示された。4.非特異的感染抵抗性の発現におけるiNOSの誘導とそれによるNO産生の意義を明らかにする目的で、BCG生菌をマウスに接種し、早期のリステリア感染に対する感染防御能の変化をしらべた。IFNγ発現とiNOS発現の誘導される条件では、強い感染抵抗性の発現がみられたが、iNOSの抑制剤であるNMMAを投与したマウスでは、抗体リステリア抵抗性が著明に減弱した。以上の結果から、リステリア感染に伴うiNOSの発現は本菌の病原因子とくにLLOに依存し、NK細胞由来のIFNγがその中心的誘導因子であること、また実際にiNOS-NOがリステリアに対する非特異的宿主防御に重要な役割を果たすことが示された。

基于我们先前的知识，单核细胞增生李斯特氏菌（一种细胞内寄生细菌）的毒力因子调节受感染宿主中的细胞因子表达，我们开发了通过感染在小鼠巨噬细胞中诱导的一氧化氮合酶，我们分析了（iNOS）表达之间的关系。 ）和李斯特菌毒力因子，并获得以下结果。 1.李施德林感染诱导的iNOS mRNA表达仅限于在巨噬细胞内表现出增殖能力的病原菌，并且在非病原菌株或死亡菌株中不被诱导。特别是，产生主要致病因子LLO（李斯特菌溶血素O）的能力被认为是重要的。 2.当使用RT-PCR检查感染时脾脏中表达的细胞因子类型与iNOS表达之间的关系时，仅当IFNγ和IL-1α表达时才观察到iNOS表达。此外，当用抗体中和 IFNγ 时，iNOS 表达受到抑制。在用抗-asialoGM1抗体+补体处理的脾细胞中，iNOS表达消失，表明IFNγ的产生依赖于NK细胞。 3.当用纯化的LLO（一种主要致病因子）刺激脾细胞时，观察到细胞因子表达的模式与用活李斯特菌刺激时完全相同，并且也依赖于IFNγ。本例表明，IFNγ以外的细胞因子，特别是IL-1α和TNFα的联合作用也可能参与iNOS的产生。 4. 为了阐明 iNOS 诱导以及由此产生的 NO 产生在非特异性感染抵抗力发展中的重要性，我们给小鼠接种了活的 BCG 细菌，并检查了预防早期李斯特菌感染的能力的变化。在诱导IFNγ表达和iNOS表达的条件下，观察到很强的感染抵抗力，但在用iNOS抑制剂NMMA处理的小鼠中，抗体对李斯特菌的抵抗力显着减弱。上述结果表明，与李斯特菌感染相关的iNOS表达取决于该细菌的致病因子，尤其是LLO，并且NK细胞来源的IFNγ是主要诱导剂，而iNOS-NO实际上对李斯特菌是非特异性的。被证明在宿主防御中发挥着重要作用。

项目成果

Fujio, Hironori: "Decrease capacity of aged mice to produce interferon-gamma in Legionella pneumophila infection." Mech. Ageing Dev.81. 97-106 (1995)

Fujio, Hironori：“降低老年小鼠在嗜肺军团菌感染中产生干扰素-γ的能力。”

Mitsuyama, Masao: "Involvment of NK cells in NO production induced by viable Mycobacterium bovis BCG in mice." J. Cell. Biochem.19B. 87-88 (1995)

Mitsuyama, Masao：“NK 细胞参与活牛分枝杆菌 BCG 在小鼠体内诱导的 NO 产生。”

Song, Fei: "In vitro generation of IFN-g-producing Listeria-specific T cells is dependent on IFN-g production by non-NK cells." Cell. Immunol.160. 211-216 (1995)

Song, Fei：“体外产生 IFN-g 的李斯特菌特异性 T 细胞依赖于非 NK 细胞的 IFN-g 产生。”

光山正雄(分担),渡辺治雄 編: "細菌感染の分子医学-その新展開-" 羊土社, 178 (1995)

Masao Mitsuyama（撰稿人）、Haruo Watanabe（编辑）：“细菌感染的分子医学 - 新进展 -” Yodosha，178 (1995)

光山正雄(分担),加藤延夫 編: "医系微生物学(第2版)" 朝倉書店, 400 (1996)

三山正夫（撰稿人）、加藤伸夫（主编）：《医学微生物学（第 2 版）》朝仓书店，400（1996）