non-T ALLにおける免疫グロブリン入鎖高頻度発現の遺伝子的解明

非 T ALL 中免疫球蛋白链频繁表达的遗传学阐明

基本信息

批准号：
05670172
负责人：
森尚義
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670172/
关键词：
non-T ALL λ5 VpreB λ鎖様遺伝子

项目摘要

我々は小児および成人におけるT細胞性以外の急性リンパ球性白血病(non-T ALL)の48例について免疫電顕を用いて免疫グロブリンの発現を検討し、報告した。免疫グロブリン軽鎖については18例中17例がλ軽鎖を発現していた。non-T ALLはpre-B細胞前後の分化段階に相当することが裏付けられており、この段階の正常Bリンパ球ではμ鎖単独、若しくは発現はないと考えられる。このため我々の免疫電顕での結果はこれまでのリンパ球初期分化の表面形質とは反する所見であった。近年、坂口、工藤等はマウスのpre-B細胞にλ鎖様遺伝子が発現していることを証明し、λ5、VpreBと命名した。その後の検索から、これら遺伝子はBリンパ球の分化成熟強い影響を及ぼし、μ鎖の発現や骨髄間質細胞との信号伝達に関係することが見いだされた。我々は、18例中17例に検出されたλ鎖陽性物質がこのλ鎖様遺伝子蛋白であるか否かを同定するため、培養細胞株について検索を行った。用いた細胞株はNALM6,NALM16,KM3,Rehである。このうちNALM6は免疫電顕でμ-λ陽性、他はいずれもλ鎖のみ陽性であった。Southern blot hybridization法による免疫グロブリン遺伝子は全細胞株で重鎖遺伝子再構成、NALM6にのみκ鎖遺伝子再構成が認められた。λ鎖遺伝子は全例で胚芽型であった。したがって、培養細胞株はpreB細胞に位置することが遺伝子的にも証明され、機能的なλ鎖は産生はされないことが判明した。また、λ鎖様遺伝子に特異的な4つのオリゴヌクレオチドを作成し、これらのプローブで培養細胞から抽出したRNAについて逆転写酵素を用いPCRを施行した。NALM16,Rehではこのλ鎖様遺伝子に特異的な増幅が認められた。以上の結果から免疫電顕で証明したλ鎖陽性物質がλ鎖様遺伝子産物であることが強く示唆された。今後は、PCR増幅産物をプローブとしたNorthern blot hybridization法での検証を行い、発表する予定である。

我们已经检查并报道了48例儿童和成人T细胞以外的48例急性淋巴白血病（非T）的免疫球蛋白的表达。在免疫球蛋白轻链中，18例中有17例具有λ光链。支持的是，非T都等同于前B细胞之前和之后的分化阶段，并且在此阶段，在正常B淋巴细胞中没有μ链或或或或表达。因此，我们在免疫电子产品上的结果与迄今为止淋巴细胞初始分化的表面形式背道而驰。近年来，Sakaguchi和Kudo已证明了小鼠前B细胞中的λ链基因，并命名为λ5和VPREB。随后的搜索发现，这些基因具有B淋巴细胞的很强成熟作用，并且与μ链的表达和与前骨髓细胞的信号传递有关。我们搜索了培养细胞，以确定这种λ链样基因蛋白是否是在18例中发现的λ链阳性物质。使用的细胞量为NALM6，NALM16，KM3，REH。其中，NALM6为免疫电子为μ-λ阳性，并且它们仅对λ链呈阳性。在所有细胞中都识别出通过Southern印迹杂交方法的免疫球蛋白基因，并且仅在NALM6中观察到κ链基因的重新配置。 λ在所有情况下，链基因都是细菌类型。因此，鉴于培养细胞的储备位于PERB细胞中，发现未产生功能性λ链。此外，创建了特定于λ链基因的四个寡核苷酸，并使用这些探针中从培养细胞中提取的RNA进行逆转录酶进行了PCR。 NALM16，REH具有该λ链基因的特异性扩增。从上述结果中，强烈建议免疫电子证明的λ-笑阳性物质是λ链样基因产物。将来，我们计划使用Northern印迹杂交方法验证并宣布它，该方法是PCR放大器的探测器。