低酸素レポーター移植担癌マウスと低酸素レポータートランスジェニックマウスの開発

缺氧报告移植荷瘤小鼠及缺氧报告基因转基因小鼠的研制

• 批准号: 19659298
• 负责人: 犬伏 正幸
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences (2008)Hokkaido University (2007)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659298/
• 关键词: 分子イメージング; 核医学(PET,SPECT); 低酸素; 放射線治療抵抗性; 遺伝子発現; 悪性種瘍; 疾患モデル動物; トランスジェニックマウス; 核医学(PET, SPECT); 光イメージング; 遺伝子発現イメージング; レポーター遺伝子; 悪性腫瘍(癌); 心臓(心筋)

具体的内容:低酸素レポーター移植担癌マウスは、低酸素応答遺伝子のプロモータ領域に存在する低酸素反応領域(hypoxia response element:HRE)の下流に,核医学レポーター遺伝子であるヒトNa+/I-共輸送蛋白(hNIS)遺伝子を連結した遺伝子構造(HRE/hNIS)を作成して培養癌細胞に安定導入し、ヌードマウスに移植することにより作成する。そのためにまず、HREの下流に生物発光ルシフェラーゼ(Luc)遺伝子を連結したベクターpGL4.26[HRE/Luc]を作成し、癌細胞株に一過性導入した上で低酸素負荷を加えて生物発光強度を測定することによって、HREの低酸素反応性をin vitroで確認した。また、hNISについても、99mTcO4-集積試験によってin vitro評価を、培養癌細胞に安定導入してヌードマウスに移植した担癌マウスを99mTc SPECTでin vivoイメージングして評価を行った。一方、低酸素レポータートランスジェニックマウスは、強力なCAGプロモータの下流にhNISを連結したpCAGGS-hNISを作成し、マウスの受精卵にマイクロインジェクションして子を得た。遺伝子型の確認(genotyping)はできたが、in vivoでの99mTcO4-集積試験系では否定的な結果となった。現在、系統確立に向けて、結果を改善させる方法を模索している。意義・重要性:移植担癌マウスは、(1)放射線治療抵抗性と低酸素との関係に関する研究、(2)低酸素によって活性化される様々な分子過程に関する研究、などに発展する。トランスジェニックマウスは、(1)癌誘発によって自然発生に近い癌に関するin vivo研究、(2)虚血性疾患における低酸素状態に関する研究、などに発展する。さらに、^<18>FAZAや^<18>FMISOによる低酸素PETイメージングと比較することによって、これらの妥当性をin vivoで評価することが可能となる。

具体细节：植入缺氧报告基因的荷瘤小鼠具有核医学报告基因，人类Na+/I-，位于缺氧反应基因启动子区域的缺氧反应元件（HRE）的下游，它是通过创建一个。构建连接有转运蛋白（hNIS）基因的基因结构（HRE/hNIS），将其稳定导入培养的癌细胞中，并移植到裸鼠体内。为此，我们首先创建了一个载体pGL4.26 [HRE/Luc]，其中生物发光荧光素酶（Luc）基因连接到HRE下游，将其瞬时引入癌细胞系，然后施加低氧负荷以产生HRE 的缺氧反应性通过测量其强度在体外得到证实。此外，使用 99mTcO4 累积测试在体外评估 hNIS，并使用 99mTc SPECT 对荷瘤小鼠进行体内成像，将其稳定引入培养的癌细胞并移植到裸鼠体内。另一方面，通过创建pCAGGS-hNIS（其hNIS连接在强CAG启动子的下游），并将其显微注射到受精小鼠卵中以获得后代，来创建缺氧报告基因转基因小鼠。基因分型是可能的，但体内 99mTcO4 累积测试系统给出了阴性结果。我们目前正在寻找改进结果的方法，以建立菌株。意义/重要性：移植荷瘤小鼠将导致（1）放射治疗抵抗与缺氧之间关系的研究，以及（2）缺氧激活的各种分子过程的研究。转基因小鼠可用于（1）对与通过癌症诱导自然发生的癌症相似的癌症进行体内研究，以及（2）对缺血性疾病中的缺氧条件进行研究。此外，通过与使用^ 18 FAZA和^ 18 FMISO的低氧PET成像进行比较，可以评估它们在体内的有效性。

项目成果

核医学による遺伝子治療・再生医療の評価

使用核医学评估基因治疗和再生医学

• 发表时间: 2008
• 作者: Shimizutani;T.;Harashina;S.;三尾稔;David Carballo and Claudia Garcia-Des Lauriers;中村民雄;酒井啓子;青柳みどり・鄭躍軍;池口明子;縄田浩志;犬伏正幸
• 通讯作者: 犬伏正幸

Molecular Imaging in Heart Failure.

心力衰竭的分子成像。

• 发表时间: 2007
• 作者: Inubushi M;et. al.
• 通讯作者: et. al.

11C-CGP-12177PETで判定した心筋β受容体密度の低下と心不全の重症度との関連.

11C-CGP-12177PET 测定的心肌 β 受体密度下降与心力衰竭严重程度之间的关系。

• 发表时间: 2007
• 作者: 納谷 昌直;他
• 通讯作者: 他

RIレポーター遺伝子を用いる分子イメージング.

使用 RI 报告基因的分子成像。

• 发表时间: 2007
• 作者: 山内太郎;大西秀之;西村雄一郎;岡本耕平(共著);Y. Nakamura;犬伏 正幸
• 通讯作者: 犬伏 正幸

ApoE-/-マウスの動脈硬化病変における脂質沈着と18F-FDG/99mTc-annexinA5集積との関連.

ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化病变中脂质沉积与 18F-FDG/99mTc-annexinA5 积累的关系。

• 发表时间: 2007
• 作者: 趙 芫;他
• 通讯作者: 他