RNAiの応用による新しい口腔がん遺伝子治療のための基礎研究

利用 RNAi 进行新型口腔癌基因治疗的基础研究

• 批准号: 17659625
• 负责人: 東野 史裕
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659625/
• 关键词: RNAi; ETSファミリー; E1AF; 転移・浸潤; 癌細胞; ETS ファミリー; がん細胞

RNA interference(RNAi)法は細胞に導入された二本鎖RNA(short interfering RNA ; siRNA)が、それと同じ配列塗持つmRNAを破壊(ノックダウン)することで、遺伝子の機能解析に有効な方法として現在注目されている。ヒトの培養細胞でもこの技術が有効であることが証明されており、哺乳動物やヒトでの応用が期待されている。我々は転写因子E1AFをクローニングし、E1AFがマトリックスメタロプロテアーゼの転写を活性化し、がん細胞に浸潤・転移活性を与えることを報告してきた。本研究の目的は口腔がん細胞でE1AFの発現をノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために最も適したRNAiの技術を開発することである。まずE1AFノックダウン用のsiRNAの設計を行い、浸潤・転移活性の高い口腔がん細胞HSC3やfibrosarcomaのHT1080、前立腺がんのPC3もしくはE1AFを強制的に発現しているNIH3T3細胞にsiRNAを導入した。その結果siMAX(invitrogen社製)が最もsiRNAの導入効率が高く、E1AFのmRNAの減少効率が高いことが判明した。さらにこの方法でE1AFがノックダウンされたHT1080、HSC3などの細胞を用いてスクラッチ法により、細胞の運動能を検討した。その結果これらの細胞は、コントロールのsiRNA(ランダムsiRNA)を導入した細胞に比べて、運動能が低いことがわかった。この結果はE1AFを効率よくノックダウンできれば、がん細胞の浸潤・転移活性を抑制できる可能性を示している。これらのことは我々が検討したRNAi法が、口腔がん細胞でE1AFの発現を効率よくノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために適した技術であることを示唆している。

RNA干扰（RNAI）方法目前正在吸引注意作为一种有效的基因功能分析方法，该方法通过使用已引入细胞的短干扰RNA（siRNA）将已引入细胞的mRNA来分析基因。该技术已被证明在人类培养细胞中有效，并有望在哺乳动物和人类中应用。我们已经克隆了转录因子E1AF，并报告E1AF激活了基质金属蛋白酶的转录，并在癌细胞中赋予了侵入性和转移活性。这项研究的目的是开发最合适的RNAi技术，以拆除口腔癌细胞中E1AF的表达并抑制其侵袭和转移活性。首先，为E1AF敲低设计了siRNA，并将siRNA引入了NIH3T3细胞中，该细胞强行表达口腔癌细胞HSC3，高浸润性和转移活性，来自纤维肉瘤的HT1080，PC3或E1AF来自前列腺癌。结果，发现Simax（由Invitrogen制造）具有最高的siRNA转移效率，并且在降低E1AF的mRNA方面的效率最高。此外，通过刮擦检查了被这种方法击倒的细胞（例如HT1080和HSC3）的运动。结果表明，这些细胞的运动性低于对照siRNA引入的细胞（随机siRNA）。该结果表明，如果可以有效地击倒E1AF，则有可能抑制癌细胞的侵袭和转移活性。这些表明我们已经研究的RNAi方法是一种适当的技术，用于有效击倒口腔癌细胞中E1AF的表达并抑制其侵袭和转移活性。

项目成果

E1AF expression is closely correlated with malignant phenotype of tongue squamous cell carcinoma through activation of MT1-MMP gene promoter.

E1AF的表达通过MT1-MMP基因启动子的激活与舌鳞状细胞癌的恶性表型密切相关。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oncology Report 13
• 作者: Izumiyama Y.;Ohiro Y.;et al.
• 通讯作者: et al.

Adenovirus E4orf6 targets pp32/LANP to control the fate of ARE-containing mRNAs by perturbing the CRM1-dependent mechanism.

• DOI: 10.1083/jcb.200405112
• 发表时间: 2005-07-04
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Higashino F;Aoyagi M;Takahashi A;Ishino M;Taoka M;Isobe T;Kobayashi M;Totsuka Y;Kohgo T;Shindoh M
• 通讯作者: Shindoh M