RNAiの応用による新しい口腔がん遺伝子治療のための基礎研究

利用 RNAi 进行新型口腔癌基因治疗的基础研究

• 批准号: 17659625
• 负责人: 東野 史裕
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659625/
• 关键词: RNAi; ETSファミリー; E1AF; 転移・浸潤; 癌細胞; ETS ファミリー; がん細胞

RNA interference(RNAi)法は細胞に導入された二本鎖RNA(short interfering RNA ; siRNA)が、それと同じ配列塗持つmRNAを破壊(ノックダウン)することで、遺伝子の機能解析に有効な方法として現在注目されている。ヒトの培養細胞でもこの技術が有効であることが証明されており、哺乳動物やヒトでの応用が期待されている。我々は転写因子E1AFをクローニングし、E1AFがマトリックスメタロプロテアーゼの転写を活性化し、がん細胞に浸潤・転移活性を与えることを報告してきた。本研究の目的は口腔がん細胞でE1AFの発現をノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために最も適したRNAiの技術を開発することである。まずE1AFノックダウン用のsiRNAの設計を行い、浸潤・転移活性の高い口腔がん細胞HSC3やfibrosarcomaのHT1080、前立腺がんのPC3もしくはE1AFを強制的に発現しているNIH3T3細胞にsiRNAを導入した。その結果siMAX(invitrogen社製)が最もsiRNAの導入効率が高く、E1AFのmRNAの減少効率が高いことが判明した。さらにこの方法でE1AFがノックダウンされたHT1080、HSC3などの細胞を用いてスクラッチ法により、細胞の運動能を検討した。その結果これらの細胞は、コントロールのsiRNA(ランダムsiRNA)を導入した細胞に比べて、運動能が低いことがわかった。この結果はE1AFを効率よくノックダウンできれば、がん細胞の浸潤・転移活性を抑制できる可能性を示している。これらのことは我々が検討したRNAi法が、口腔がん細胞でE1AFの発現を効率よくノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために適した技術であることを示唆している。

RNA干扰（RNAI）方法是通过在细胞中引入的双链链RNA（短链RNA; siRNA）的相同阵列涂层（敲击）mRNA的有效方法目前正在引起关注。已经证明，该技术在人类文化细胞中有效，预计将应用于哺乳动物和人类。我们报道了转录因子E1AF克隆，E1AF激活了基质金属蛋白酶的转录，并为癌细胞提供浸润和转移活性。这项研究的目的是拆除口腔癌细胞中E1AF的表达，并开发最合适的RNAi技术来抑制其浸润和转移活性。首先，我们为E1AF敲低设计了siRNA，并将siRNA引入了强迫表达HSC3，纤维肉瘤HT1080或E1AF的NIH3T3细胞，或具有​​高度浸润和转化活性的E1AF。结果，发现Simax（制成的Invitrogen）最有可能引入siRNA及其E1AF mRNA降低效率。此外，使用诸如HT1080和HSC3等细胞的刮擦方法检查了该方法，其中E1AF被击倒。结果，发现这些细胞的运动能力低于引入对照siRNA（随机siRNA）的细胞。结果表明，可以有效地将E1AF击倒并抑制癌细胞的侵袭和转移活性的可能性。这些事实表明，我们认为的RNAi方法是一种合适的技术，可有效击倒E1AF在口腔癌细胞中的表达并抑制其浸润和转移活性。

项目成果

E1AF expression is closely correlated with malignant phenotype of tongue squamous cell carcinoma through activation of MT1-MMP gene promoter.

E1AF的表达通过MT1-MMP基因启动子的激活与舌鳞状细胞癌的恶性表型密切相关。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oncology Report 13
• 作者: Izumiyama Y.;Ohiro Y.;et al.
• 通讯作者: et al.

Adenovirus E4orf6 targets pp32/LANP to control the fate of ARE-containing mRNAs by perturbing the CRM1-dependent mechanism.

• DOI: 10.1083/jcb.200405112
• 发表时间: 2005-07-04
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Higashino F;Aoyagi M;Takahashi A;Ishino M;Taoka M;Isobe T;Kobayashi M;Totsuka Y;Kohgo T;Shindoh M
• 通讯作者: Shindoh M