上気道炎症の病態形成におけるToll-like receptor(TLR)の役割

Toll 样受体 (TLR) 在上呼吸道炎症发病机制中的作用

• 批准号: 17659531
• 负责人: 川内 秀之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659531/
• 关键词: 上気道炎症; Toll-like receptor; TLR2ノックアウトマウス; 副鼻腔炎; 中耳炎; real time RT-PCR; Laser captured microdissection

1.マウス急性鼻炎モデルの作製急性鼻炎モデルと同様、C57BL6マウスを用いて、TLR2のアゴニストであるlipoproteinを点鼻投与し、鼻粘膜の急性炎症を誘導し、鼻腔粘膜についてHE染色にて検討を行い病理学的に検討した。また、粘膜におけるMIP-2発現について、免疫沈降-ウエスタンブロット法にて解析した。さらに、TLR2遺伝子欠損マウスを用いて、lipoproienあるいは生菌点鼻による鼻炎の病態について解析し、炎症病態の状況を観察した。2.マウス急性中耳炎モデルおよび内耳障害モデルの作製C57BL/6マウスの顎下部より中耳骨胞にTLRについてそのアゴニストを注入し、中耳炎成立後、骨胞を採取し、中耳貯留液中のMIP-2産生量(IL-8のマウス機能的ホモログ)をELISA法で測定した。さらに中耳粘膜や内耳の炎症所見を病理組織学的に検討した。さらに、TLR遺伝子変異マウス、TLR2ノックアウトマウスを用いて、肺炎球菌やインフルエンザ菌など、中耳炎の起炎菌を用いて骨胞に注入し、MIP-2発現および中耳粘膜さらには内耳の炎症所見について検討中である。3.上気道粘膜上皮細胞におけるTLR遺伝子発現慢性副鼻腔炎や鼻茸の患者から採取した鼻副鼻腔粘膜や鼻茸組織を用いて、免疫組織化学的検討(好酸球浸潤の程度、サイトカイン産生Th2細胞など)を行なった。さらにLaser-captured microdissection(LCM)を用いて、組織切片から鼻粘膜上皮や樹状細胞を切りだし、分子生物学的手法を用いて、TLRの発現を検討する系を確立した。4.気道上皮細胞・肥満細胞からのサイトカイン産生におけるアレルギー治療薬の抑制効果上気道の炎症病態に関わる肥満細胞や上皮細胞をIgEのクロスリンキングやPAMPにより刺激し、サイトカインやケモカイン産生のin vitroの実験系やin vivoでの急性鼻炎モデルを確立して、抗ヒスタミン薬や免疫修飾作用のある薬剤を用いた炎症病態の制御に関する種々の検討を行い、成果をあげた。5.IL-8遺伝子転写とTLR下流のシグナル伝達機構についてIL-8遺伝子プロモーター領域には、NF-κBおよびAP1結合エレメントが存在する。TLRの各種アゴニストを用いて鼻粘膜由来の上皮細胞の刺激を行い、IL-8遺伝子発現をノーザンブロット法かリアルタイムPCR法にて解析を行い、蛋白レベルの発現をウエスタンブロット法にて検討した。また、AP1を誘導するMAPKinase経路について、ウエスタンブロット法およびキナーゼアッセイにて検討した。NF-κB経路については、ルシフェラーゼアッセイでの検討を行った。

1。与急性鼻炎模型相似的小鼠急性鼻炎模型的制备，用脂蛋白（TLR2的激动剂）鼻鼻鼻施用C57BL6小鼠，以诱导鼻粘膜的急性炎症，并用鼻粘膜进行鼻粘膜炎症，并用他的染色和病理学检查。此外，通过免疫沉淀 - 西方印迹分析了粘膜中MIP-2的表达。此外，使用缺乏TLR2基因的小鼠分析脂肪虫或活细菌引起的鼻炎的病理，并观察炎症病理学的状态。 2。从下颌骨的下部将小鼠C57BL/6小鼠激动剂的内耳疾病的制备和内耳疾​​病的模型注入了耳鼻炎培养基，并在确定耳炎培养基建立后，收集了骨化术，收集了骨化的MIP-2产生量（IL-8的小鼠功能IL-8）在中耳中的含量是由Meideragition sopection sorema cormotial sorekatie sories cormate sories aris aris ariS aris ariS ariS ariS ariS ariS。此外，在组织病理学上检查了中耳粘膜和内耳中炎症的发现。此外，使用TLR基因突变小鼠和TLR2基因敲除小鼠，将小鼠使用耳炎培养基（例如肺炎球菌和流胞菌）注射到骨肉杆菌中，以检查中耳和内耳的MIP-2表达和炎症发现。 3。TLR基因在上呼吸道粘膜上皮细胞中的表达。使用从慢性鼻窦炎和鼻多核心患者中收集的鼻窦粘膜和鼻多氧基组织，免疫组织化学研究（例如嗜酸性粒细胞浸润程度，细胞因子产生的TH2细胞）。此外，使用激光捕获的显微解剖（LCM），从组织切片中切除鼻粘膜上皮和树突状细胞，并建立了一个系统以使用分子生物学技术来研究TLR的表达。 4。过敏治疗药物对来自气道上皮细胞和肥大细胞在气道中参与炎症病理学的肥大细胞产生的细胞因子的抑制作用，并通过交联的IgE和PAMP被刺激，并建立了一种在体外的实验性系统，并在体外进行了炎症和趋化性的体外实验系统，并在体内炎症中的炎症和炎症模型模型，该研究的炎症和敏感性模型模型，该模型是在炎症中的，并且是在炎症中的各种研究。和具有免疫修饰剂的药物，并获得了结果。 5。TLR下游的IL-8基因转录和信号传导机制在IL-8基因启动子区域中有NF-κB和AP1结合元件。使用TLR的各种激动剂刺激了源自鼻粘膜的上皮细胞，并使用Northern印迹或实时PCR分析IL-8基因表达，并使用Western blotting检查了蛋白水平表达。此外，通过Western印迹和激酶测定研究了诱导AP1的MAPIN酶途径。在荧光素酶测定中检查了NF-κB途径。

项目成果

鼻アレルギー性炎症を抑制する薬剤

抑制鼻过敏性炎症的药物

• 发表时间: 2005
• 期刊: ENTONI 57
• 作者: Hideyuki kawauchi;Shingo kataoka;Hisashi Ohga;Akemichi Murata;Mitsuhiro Kimura;Noriaki Aoi;Ichiro Morikura;Kaoru Takamura;Yasuhiko Shimizu;Hidenori Takagi;石光亮太郎
• 通讯作者: 石光亮太郎

Interleukin(IL)-15のマウスアレルギー性鼻炎モデル実効相に及ぼす影響についての検討.

白细胞介素(IL)-15对小鼠过敏性鼻炎模型有效期的影响研究。

• 发表时间: 2005
• 期刊: 日本鼻科学会会誌 44・1
• 作者: Hideyuki kawauchi;Shingo kataoka;Hisashi Ohga;Akemichi Murata;Mitsuhiro Kimura;Noriaki Aoi;Ichiro Morikura;Kaoru Takamura;Yasuhiko Shimizu;Hidenori Takagi;石光亮太郎;Takaya Yamada;川内秀之;石光亮太郎;石光亮太郎
• 通讯作者: 石光亮太郎

上気道アレルギー性炎症の制御に向けた研究の動向

控制上呼吸道过敏性炎症的研究趋势

• 发表时间: 2006
• 期刊: アレルギー科 21・6
• 作者: Noriaki Aoi;Tokuko Masuda;Daisuke Murakami;Toshiki Yajima;Hiroyuki Mizubuchi;Hisakata Yamada;Hideyuki Kawauchi;Yasunobu Yoshikai;川内秀之
• 通讯作者: 川内秀之

アレルギー性鼻炎の制御に向けた治療戦略の確立

建立控制过敏性鼻炎的治疗策略

• 发表时间: 2007
• 期刊: 臨床免疫・アレルギー科 (印刷中)
• 作者: Hattori H;Okano M;et al. (6人中3番目);岡野光博(分担執筆者);川内秀之
• 通讯作者: 川内秀之

Mucosal immunity of nasopharynx : an experimental study in TCR-transgenic (OVA23-3) mice

鼻咽粘膜免疫：TCR 转基因 (OVA23-3) 小鼠的实验研究

• 发表时间: 2005
• 期刊: Rhinology 43
• 作者: Hideyuki kawauchi;Shingo kataoka;Hisashi Ohga;Akemichi Murata;Mitsuhiro Kimura;Noriaki Aoi;Ichiro Morikura;Kaoru Takamura;Yasuhiko Shimizu;Hidenori Takagi;石光亮太郎;Takaya Yamada
• 通讯作者: Takaya Yamada