分子病態検査学的手法による漢方医学診断(証)の解明

利用分子病理学检测方法阐明中医诊断（证）

基本信息

批准号：
17659201
负责人：
仁井見英樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、西洋医学で重視される「根拠に基づいた医療(EBM)」や「遺伝子情報に基づいた医療(テーラーメイド医療)」の考えを漢方医学の「証」の診断に照合することで、「証」の分子病態を解析することである。目的達成の為、平成18年度は以下の研究を実施した。cDNAマイクロアレイを用いた関節リウマチにおける「証」検証研究富山大学和漢診療科を受診する患者群から、RA患者を診察し、ACR score set,年齢、性、合併症病名、血圧、白血球数、血小板数、CRP, RF,赤沈、MMP-3,の検査を投薬前後で実施した。尚、承認された倫理委員会要項に則り採血と遺伝子解析に関するインフォームドコンセントを得た。上記選考基準を満たし、「桂枝加朮附湯」服用(一ヶ月)にて、症状が緩和した患者(3例)と緩和しなかった患者(3例)の桂枝加朮附湯服用前と後の末梢血リンパ球を検体とした。3例ずつのリンパ球検体からmRNAを抽出し、それぞれの検体を治療前・後、responder/non-responderに分けてduplicateでマイクロアレイ解析を行った。尚、t-test p-value<0.05のcut off値で統計解析を施行した。以上、cDNAマイクロアレイによる遺伝子発現プロファイルの解析により、以下の研究成果を得た。(1)漢方薬有効例で服用前後に特異的に変動した(無効例では変動しない)54の遺伝子を明らかにした。(2)漢方薬有効例で特異的に変動し、関節リウマチ(RA)特異的な16の遺伝子を明らかにした。(3)得られた16の遺伝子プロファイルは、HLA遺伝子群や、γ-globulin関連遺伝子が多く含まれており、RAの病態メカニズムの解明と、漢方薬(桂枝加朮附湯)の薬効メカニズムの解明に寄与することが期待される。(4)無効例に比較して有効例で投薬前に発現差があり、桂枝加朮附湯で発現が変動するRA関連遺伝子として、11の遺伝子を明らかにした。これらの遺伝子発現を漢方薬投薬前に調べることにより、漢方薬が有効な患者と無効な患者を投薬前に判断できる可能性がある。今後、漢方薬薬効を診断する遺伝子診断システムの確立が期待される。(5)これらの抽出した遺伝子発現プロファイルの中で、特にHLA-DRB1を中心に、漢方薬の分子レベルでの薬効メカニズムを考察した。HLA-DRB1はRAの病態に関与するHLAII型遺伝子として知られており、自己抗体の産生に関与すると近年報告されている。漢方薬(桂枝加IL附湯)が有効な患者群では、無効な患者群に比較して2倍程HLA-DRB1の発現が上昇しており、漢方薬投薬によってその発現を50%まで減らすことが出来る。この作用が、HLA-DRB1による抗原提示作用の減少につながり、RAの病態改善(炎症の改善)に導くものと考えられる。

这项研究的目的是通过比较西方医学中强调的“估计医学（EBM）”和“基于遗传信息的药物（泰勒制造的医学）”的思想与中国草药中的“证明”的诊断来分析“证明”的分子病理。为了实现目标，在2006年进行了以下研究。一项研究使用cDNA微阵列验证类风湿关节炎的“证明”。 From a group of patients visiting the Japanese and Chinese medicine department of Toyama University, RA patients were examined, and tested for ACR score set, age, sex, name of complications, blood pressure, white blood cell count, platelet count, CRP, RF, erythrombocytes, and MMP-3 were performed before and after medication.此外，根据批准的道德委员会指南获得了有关血液收集和遗传分析的知情同意。服用Keishi Kaotsukuto之前和之后的外周血淋巴细胞（一个月）被用作缓解症状并且没有缓解其症状的患者的样本（3例）（3例）（3例）。从三个淋巴细胞标本中提取mRNA，并将每个样品分为响应者/非反应器，并使用重复项分析微阵列分析。此外，统计分析以t检验p值<0.05的缩短值进行统计分析。通过使用cDNA微阵列分析基因表达谱获得以下研究的上述结果。（1）我们揭示了54个基因在服用有效草药的情况下（在药物无效的情况下）服用药物之前和之后特别波动。（2）在有效的草药病例中特有的16个基因已揭示了特定于类风湿关节炎（RA）的基因。（3）获得的16个基因谱包含许多HLA基因和与γ-球蛋白相关的基因，并有望有助于阐明RA的病理机制以及中药医学的药物功效机制（Keijikika-kyuto）。（4）与无效的病例相比，在有效病例中给药前表达有11个基因是与RA相关的基因，并且其表达随Keishikagotto的变化而变化。通过在服用草药之前检查这些基因表达，可以在服用药物和无效的患者之前确定中药的患者。希望将来建立一个遗传诊断系统来诊断中草药的有效性。（5）在这些提取的基因表达谱中，我们检查了中草药分子水平的药物功效机制，重点是HLA-DRB1。 HLA-DRB1被称为参与RA病理的HLAII型基因，最近据报道参与自身抗体的产生。在中药有效的患者（Keijika IL Tsubo）中，HLA-DRB1的表达增加了大约是无效的患者的两倍，并且通过使用中草药药物可以将草药的表达降低至50％。人们认为这种作用会导致HLA-DRB1的抗原表现效应降低，从而改善了RA病理（炎症的改善）。