ファージ由来溶菌酵素を利用するメチシリン耐性黄色ブドウ球菌院内感染制御

使用噬菌体来源的裂解酶控制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染

基本信息

批准号：
16659278
负责人：
藤枝幹也
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

I.黄色ブドウ球菌ファージ由来溶菌酵素投与の安全性の検討(1)過剰投与の影響:ファージ由来溶菌酵素500Uは、マウス鼻腔からのMRSA除菌およびMRSA全身感染マウスの救命に十分な量であることを確認した。更に、腹腔内に過剰量の溶菌酵素1000U,2000U,4000Uを単独で投与し、接種直後から3ヶ月後まで生存率および全身状態を検討した。その結果全てのマウスにおいて生存率および全身状態に何ら影響は認められなかった。またマウス鼻腔内に溶菌酵素500U単独滴下した場合も、マウスの全身状態への影響は認められなかった。(2)反復投与の影響:マウス腹腔に500U溶菌酵素を10日毎に3回投与を行なった。3回目投与においても、全身状態に何ら影響はなくアナフィラキシー等は観察されなかった。(3)抗溶菌酵素抗体の産生および溶菌活性への影響の検討:上記3回溶菌酵素投与マウスの血清を採取し、Western blotting法及びELISA法により抗溶菌酵素抗体の産生を確認した。抗溶菌酵素抗血清と溶菌酵素を混合後37℃、1時間保温し溶菌活性への影響を検討した。しかし、抗体の溶菌活性への影響はほとんど認められなかった。II.溶菌酵素調剤法の検討:ヒト鼻腔、皮膚への溶菌酵素投与用薬剤開発を目指し、粉末剤および軟膏剤としての製剤法の可能性を検討した。(1)精製酵素溶液を凍結乾燥して粉末状にし、10日後生食等で再度溶液化し溶菌活性を検討した。その結果粉末状でも活性を保持していることが分かった。(2)溶菌酵素溶液を水溶性軟膏基剤と混合し、4℃で10日間保存し溶菌活性を検討した結果軟膏基剤と混合した状態でも、溶菌活性は安定に保持されることが明らかとなった。III.結論ファージ由来溶菌酵素は、安全性の高い薬剤としてMRSA除菌等に使用できる可能性が強く示唆された。

一、金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶给药安全性考察 (1)过量给药的影响：500U噬菌体裂解酶足以根除小鼠鼻腔中的MRSA，挽救小鼠生命我证实了这一点。此外，腹腔内给予过量的裂解酶(1000U、2000U、4000U)，并检查从接种后立即到3个月后的存活率和一般状况。结果，没有观察到对所有小鼠的存活率或一般状况的影响。此外，当将500U的裂解酶单独滴入小鼠鼻腔时，未观察到对小鼠一般状况的影响。 (2)重复给药的效果：将500U的裂解酶每10天给予小鼠腹腔3次。即使在第三次给药时，对一般状况也没有影响，并且没有观察到过敏反应。 (3)检测抗裂解酶抗体的产生及对溶菌活性的影响：收集裂解酶处理3次的小鼠血清，通过Western blotting和ELISA证实抗裂解酶抗体的产生。。将抗裂解酶抗血清和裂解酶混合后，将混合物在37℃下保持1小时以检查对裂解活性的影响。然而，几乎没有观察到对抗体溶菌活性的影响。 II.溶解酶制备方法的研究：为了开发一种用于向人体鼻腔和皮肤施用溶解酶的药物，我们研究了粉剂和软膏剂的制剂方法的可能性。 (1)将纯化的酶溶液冷冻干燥成粉末状，10天后用生理盐水等复溶成溶液，检查溶菌活性。结果表明，即使是粉末形式，它仍保留其活性。 (2)将裂解酶溶液与水溶性软膏基质混合，在4℃下保存10天，并检查裂解活性，结果表明，即使与软膏基质混合，也能稳定地维持裂解活性。就成了。 III.结论强烈建议噬菌体来源的裂解酶可作为高度安全的药物来根除MRSA。