分子生物学的手法による魚卵・仔魚捕食者の特定と初期減耗研究への試行的適用

利用分子生物学方法识别鱼卵和幼虫的捕食者并在早期损耗研究中试用

基本信息

批准号：
15658058
负责人：
中山耕至
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.被食仔魚DNA検出用プライマーの作成昨年までに作成したミトコンドリアDNA調節領域,16Sリボゾーム領域に加え,新たにシトクロームB領域に被食仔魚検出用のPCRプライマーを作成した.様々なDNA濃度において増幅検出試験を行ったところシトクロームBプライマーにおいてもっとも高感度の検出結果が得られたため,以下の分析においてはこの手法を用いた.2.ミズクラゲによるカタクチイワシ仔魚消化時間の推定ミズクラゲを個別に小型飼育容器に収容し,カタクチイワシ仔魚1個体を与えて消化されるまでの時間を測定した.18℃と25℃の2水温区を設け,平均傘径101.1mmのミズクラゲおよび平均体長20.1mmのカタクチイワシを用いた.両水温区ともに,捕食されたカタクチイワシ仔魚は3時間後には形態的には同定不可能なほどに消化され,6時間後には肉眼および実体顕微鏡下での確認が困難となった.しかし,胃腔の内容物からDNA増幅を試みたところ,18℃区では6時間後までの全個体で,25℃区では1個体を除く全ての個体で捕食されたカタクチイワシのDNAが検出され,本手法の有効性が確認された.3.天然海域で採集されたミズクラゲからの被食仔魚DNA検出2005年4月から9月にかけ,若狭湾西部の栗田および舞鶴湾内の2定点において1-2回/月の頻度でミズクラゲの採集を行った.ネット内部での受動的な卵・仔魚捕食を避けるため,採集には目合い3mmのネットを用いた.採集されたミズクラゲは,船上において傘径を計測するとともに胃腔を切り出しエタノール中に保存した.1定点での採集数が多すぎる場合は無作為に一部を取り出してサンプルとし,8回の調査から計61個体(平均傘径127.6mm)のミズクラゲが得られた.そのうち46個体の胃腔内容物から粗DNAを抽出しPCR法を行ったところ,7個体から魚類由来のDNAが検出され,その多くはカタクチイワシと推定された.

1. 用于检测猎物幼鱼 DNA 的引物的创建除了去年创建的线粒体 DNA 调节区和 16S 核糖体区域之外，我们还创建了用于细胞色素 B 区域中的猎物幼鱼检测的新 PCR 引物。各种 DNA 浓度我们在进行扩增检测试验时，使用细胞色素B引物获得了最灵敏的检测结果，因此在下面的分析中采用了该方法2.海月水母对鳀鱼幼虫的消化时间的估算。将海月水母单独饲养在小型饲养容器中，给予1条鳀鱼幼体，测量它们被消化所需的时间。设置两个水温区，分别为18℃和25℃ 20.1mm Katakuchii。在两种水温下，捕食的鳀鱼幼虫在3小时后都被消化到无法进行形态识别的程度，而在6小时后，用肉眼或在立体显微镜下也难以识别。，从胃腔内容物中扩增 DNA 是不可能的。当我们尝试这一方法时，在 18°C 区域长达 6 小时后，在所有个体中都检测到了来自被捕食凤尾鱼的 DNA，在 25°C 区域除了一只个体之外的所有个体中都检测到了来自被捕食凤尾鱼的 DNA，证实了该方法的有效性。 3 。在自然水域中采集的海月水母的猎物幼体DNA检测 2005年4月至9月，每月在若狭湾西部的栗田湾和舞鹤湾的两个固定点采集水母被动卵和幼体，以防止被捕食，网内有3毫米的间隙。用于收集。在船上测量采集到的海月水母的伞径，切出胃腔并保存在乙醇中。如果在一个固定点采集过多，则随机取出一部分进行取样，总共6个。结果来自 8 项调查。获得月水母个体1只（平均伞直径127.6毫米），从46个体的胃腔内容物中提取粗DNA并进行PCR，在7个体中检测到来自鱼的DNA，并且推测其中大部分是来自鱼的DNA。凤尾鱼。