拡張型心筋症における新規自己抗体「抗Na-K-ATPase抗体」の催不整脈作用

新型自身抗体“抗Na-K-ATP酶抗体”对扩张型心肌病的致心律失常作用

• 批准号: 12770376
• 负责人: 馬場 彰泰
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kitasato Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770376/
• 关键词: 拡張型心筋症; 自己抗体; 催不整脈作用; 心肥大

抗Na-K-ATPase抗体の有性鶏卵に対する催不整脈作用蛍光免疫染色法およびwestern blottin法にて心筋細胞膜Na-K-ATPaseポンプに対する抗原抗体反応を確認している、拡張型心筋症患者5例の血清からAffi-Gel protein-A MAPS II kit (Bio-rad)によって免疫グロブリンG(IgG)を精製した。有性鶏卵に精製IgGを2.0mg/卵(各々n=10)ずつ添加し、投与60分間の催不整脈効果を観察した。pGEX発現ベクターによって、Na-K-ATPaseのαサブユニット(α1〜3)およびβサブユニット(β1〜2)を産生精製後、各1.0mg/卵ずつ前投与して、精製IgGの催不整脈効果がブロックされるか観察した。全患者5例で催不整脈効果が完全ブロックされたのは、α3サブユニット前投与のみであったため、pGEXベクターをplasmid delitionして、本自己抗体のエピトープを同定した。その結果、同サブユニットの中でもM7-M8αループを形成する第871〜895アミノ酸のみが、本自己抗体の催不整脈作用をブロックしたため、同配列内にエピトープが存在することが示唆された。Na-K-ATPase自己免疫ラットモデルの作成本ラットモデルにおける心筋細胞膜Na-K-ATPaseの変化を、比色定量法、Western blotting法、Nothern blotting法によって、測定した。本ポンプ活性は、免疫2ヶ月より低下を示し、免疫6ヶ月後まで持続していた。Western blottingでは、α1およびα2には有意な変化を認めず、発現量が少なかったα3のみ有意な減少を認めた。この変化は、Nothern blottingにおいてもmRNAレベルで観察された。これらのアイソホーム変化は、通常の肥大心で観察されるものとは異なり、本モデル特異的な現象であることが示唆された。

免疫球蛋白G（IgG）通过五个扩张性心肌病患者的血清中的亲属蛋白A MAPS II试剂盒（Bio-RAD）纯化，这证实了使用抗原抗原抗体对抗原抗原抗体的响应，使用了对蛋白质鸡蛋的抗原膜Na-k-ATPase泵，以供性鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋鸡蛋的方法和性鸡蛋鸡蛋的方法。将纯化的IgG以2.0 mg/鸡蛋（每个= 10）添加到性鸡蛋中，并且观察到肾上腺心律失常的作用60分钟。在产生和纯化Na-K-ATPase的α亚基（α1-3）和β亚基（β1-2）之后，并纯化了1.0 mg/egg，每个人都会预先固定以确定是否阻止了纯化IgG的亲心律失常效应。由于α3亚基预投入是对所有五名患者的肾上腺心律失常效应的唯一完全阻塞，因此PGEX载体被质粒质量降低以识别自身抗体的表位。结果，在亚基中，仅形成M7-M8α环的氨基酸871至895阻断了自身抗体的促进性效应，这表明表位在同一序列内存在。在该大鼠模型中创建心肌细胞膜Na-k-ATPase中的Na-k-ATPase自身免疫大鼠模型的变化，通过比色定量，蛋白质印迹和NotHern印迹方法测量。该泵活性从2个月的免疫力降低，一直持续到6个月的免疫力。蛋白质印迹在α1和α2中没有显着变化，并且只有较小的表达水平的α3显示出显着降低。在Nothern印迹的mRNA水平上也观察到了这种变化。与在正常肥大中观察到的不同，这些同工型变化被认为是当前模型的特定的。

项目成果

Iwata M, Yoshikawa T, Baba A, et al.: "Autoimmunity Against the Second Extracellular Loop of β1-Adrenergic Receptors Induces β-Adrenergic Receptor Desensitization and Myocardial Hypertrophy In Vivo"Cire Res. 88. 578-586 (2001)

Iwata M、Yoshikawa T、Baba A 等人：“针对β1-肾上腺素受体第二细胞外环的自身免疫诱导β-肾上腺素受体脱敏和体内心肌肥大”Cire Res. 88. 578-586 (2001)

Iwata M, Yoshikawa T, Baba A, et al.: "Autoantibodies against the second extracellular loop of β1-adrenergic receptors predict ventricular tachycardia and sudden death in patients with DCM"J Am Coll Cardiol. 37. 418-424 (2001)

Iwata M、Yoshikawa T、Baba A 等人：“针对 β1-肾上腺素能受体第二个细胞外环的自身抗体可预测 DCM 患者的室性心动过速和猝死”J Am Coll Cardiol。 37. 418-424 (2001)

Baba A, Yoshikawa T, Mitamura H, et al.: "Autoantibodies against sarcolemmal Na-K-ATPase in patients with dilated cardiomyopathy"J Cardiol. 39. 50-51 (2002)

Baba A、Yoshikawa T、Mitamura H 等人：“扩张型心肌病患者肌膜 Na-K-ATP 酶的自身抗体”J Cardiol。

Yoshikawa T,Baba A,Suzuki M,Yokozuka H, et al.: "Effectiveness of carvedilol alone versus carvediol + pimobendan for severe congestive heart failure."Am J Cardiol. 85(12). 1495-1497 (2000)

Yoshikawa T、Baba A、Suzuki M、Yokozuka H 等人：“单用卡维地洛与卡维地洛匹莫苯丹治疗严重充血性心力衰竭的疗效。”Am J Cardiol。

Baba A, Yoshikawa T, Chino M, et al.: "Characterization of Anti-Myocardial Autoantibodies in Japanese Patients With Dilated Cardiomyopathy"Jpn Circ J. 65. 867-873 (2001)

Baba A、Yoshikawa T、Chino M 等：“日本扩张型心肌病患者抗心肌自身抗体的特征”Jpn Circ J. 65. 867-873 (2001)