子宮内膜癌、頚癌及び卵巣癌におけるCD44遺伝子発現異常に関与する転写因子の解明

阐明与子宫内膜癌、宫颈癌和卵巢癌中异常 CD44 基因表达相关的转录因子

基本信息

批准号：
12770096
负责人：
三枝信
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

平成13年度は、先ず、子宮内膜癌、頚癌及び卵巣癌におけるCD44遺伝子プロモーター領域のDNAメチレーションの検索を、1)制限酵素(Hap II, Msp I)を用いた検索(外科切除材料及び培養細胞株、2)Bisulfite処理による検索(外科切除材料及び培養細胞株)、および3)CD44遺伝子が発現抑制されている培養細胞株を用いて脱メチル化剤である5-anacytidineによるCD44遺伝子発現の変化を確認を行った。子宮内膜癌、頚癌及び卵巣癌の臨床材料および培養細胞において、メチレーション関連制限酵素による検索およびbisulfite処理による検索で、CD44遺伝子のプロモーター領域のメチレーションは全く認められなかった。この結巣より婦人科悪性腫瘍におけるCD44遺伝子発現の変化はepigeneticよりはtranscriptionalないしposttanscriptionalな要因が関与していると考えた。次に、CD44遺伝子の転写調節にβ-カテニン遺伝子が直接に関与しているかを検索した。平成12年度に報告したように、β-カテニン遺伝子発現異常は子宮内膜癌および卵巣癌の類内膜型の発生や分化に関与するため、先ず、子宮内膜癌の培養細胞でtransfection法,gel shift法およびwestern blot法を用いて両者の関連性を検索したが、明らかな関連性は見いだせなかった。しかしながら、研究の副産物としてβ-カテニン蛋白は核内転写因子のTCF4と協調して細胞周期をG2/M期で停止させmitotic cell deathを誘導することを偶然見出した。今後、この現象のメカニズムを解明する予定である。尚、CD44遺伝子発現の調節には今回とこれまでの我々の結果から、主にtranscriptional factorが重要であると判断した。

2001财年，我们首先使用1）限制性内切酶（Hap II、Msp）对子宫内膜癌、宫颈癌和卵巢癌的CD44基因启动子区域的DNA甲基化进行了研究I）使用手术切除材料和培养细胞系进行搜索，2）使用亚硫酸氢盐处理（手术切除材料和培养细胞系）进行搜索，以及3）使用CD44基因表达受到抑制的培养细胞系进行去甲基化我们确认了CD44的变化。由化学试剂 5-anacytidine 引起的基因表达。在子宫内膜癌、宫颈癌和卵巢癌的临床材料和培养细胞中，使用甲基化相关限制性内切酶和亚硫酸氢盐处理进行检索，未观察到CD44基因启动子区域的甲基化。基于这一发现，我们认为转录或转录后因子而不是表观遗传因子参与了妇科恶性肿瘤中CD44基因表达的变化。接下来，我们研究了β-catenin基因是否直接参与CD44基因的转录调控。据2000年报道，β-catenin基因表达异常参与了子宫内膜样类型的子宫内膜癌和卵巢癌的发生和分化，我们使用凝胶转移法和蛋白质印迹法寻找两者之间的关系，但尚不清楚。关系被发现。然而，作为我们研究的副产品，我们意外地发现β-catenin蛋白与核转录因子TCF4协同作用，将细胞周期阻滞在G2/M期并诱导有丝分裂细胞死亡。未来，我们计划阐明这种现象的机制。基于这一结果和之前的结果，我们确定转录因子在调节 CD44 基因表达中起主要作用。