白血球の血管外遊出メカニズム

白细胞外渗机制

基本信息

批准号：
12770002
负责人：
星治
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770002/
关键词：
白血球血管外遊走接着分子 β2インテグリン炎症好中球基底膜

项目摘要

本研究の目的は、炎症による白血球の血管外遊走のメカニズムを形態学的手法を用いて解析することにある。そのために、局所的に走化因子を投与し、細静脈内における白血球の遊出過程を免疫組織化学的手法も用いて、電子顕微鏡による解析を行った。まず、マウスの口唇に白血球走化因子のひとつであるN-formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanine(fMLP)を投与し、経時的に白血球が細静脈の内皮に接着し内皮細胞の細胞質を貫き、血管内皮と基底膜の間に一時とどまり、血管外に遊走していく像を電子顕微鏡で確認した。次に、白血球が遊走していく過程において、接着分子のひとつであるβ2インテグリンの白血球における局在の変化を観察した。具体的には、血管内皮に接着している白血球が抗インテグリン抗体で陽性に染色されることを光学顕微鏡観察で確認した後、金コロイドを用いて電子顕微鏡観察を行った。血管内皮に粘着した白血球では粘着部位にβ2インテグリンが多く存在し、内皮を貫きつつある白血球では基底膜側に多くあり、内皮と基底膜の間にとどまる白血球は内皮側と基底膜側の両者に分布していた。さらに、白血球が細胞質を狭小化させて基底膜よりを通過しつつある過程では内皮側にβ2インテグリンが多く存在していた。以上の結果から、生体において刺激された白血球が血管内から血管外に遊走していく過程において、接着分子の局在はダイナミックに変化することが明らかになった。

本研究的目的是利用形态学技术分析炎症引起的白细胞外渗的机制。为此，我们局部施用趋化因子，并使用免疫组织化学和电子显微镜分析白细胞在微静脉内的迁移过程。首先，将白细胞趋化因子N-甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）注射到小鼠的嘴唇上，随着时间的推移，白细胞粘附在小静脉的内皮上，穿透内皮细胞的细胞质，并渗透到血液中。电子显微镜显示细胞暂时停留在内皮和基底膜之间然后迁移出血管的图像。接下来，我们观察了白细胞迁移过程中粘附分子之一β2整合素在白细胞中定位的变化。具体而言，通过光学显微镜确认附着于血管内皮的白细胞被抗整联蛋白抗体呈阳性染色后，使用胶体金进行电子显微镜观察。粘附在血管内皮上的白细胞在粘附部位有大量的β2整合素，穿透内皮的白细胞在基底膜侧有大量的β2整合素，残留在内皮和基底之间的白细胞膜在内皮和基底膜两侧均分布有β2整合素。此外，在白细胞缩小细胞质并穿过基底膜的过程中，β2整合素在内皮侧丰富。上述结果表明，受刺激的白细胞从血管内部迁移到血管外部的过程中，粘附分子的定位发生动态变化。