舌動脈血管反応性に対する活性酸素ラジカル種の作用様式と弁別評価

活性氧自由基对舌动脉血管反应性的作用方式及鉴别评价

基本信息

批准号：
11771151
负责人：
吉野文彦
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

血管反応性に対し,活性酸素種の種特異的作用様式が存在するか否か詳細に解析することを標記研究課題の最終目標とする。昨年度は神経伝達物質であるノルアドレナリン(NA)及び血管平滑筋張力を測定することにより,活性酸素種の作用を整理するための基礎実験を行った。本年度はその基礎実験を基盤として詳細な作用様式を検討するための実験に着手した。従って,シナプス前作用(α受容体に対する作用)に対して一重項酸素(^1O_2)がどのような特異的修飾作用を示すか解析することを目的の基本とした。ニュージーランド白色家兎から摘出した血管螺旋状標本を作成した。表面灌流装置内のバスに標本を懸垂し,O_2,CO_2混合ガスにより通気したKrebs-Ringer溶液を表面灌流させ,安定期間後に測定を開始し,10分間の^1O_2曝露・10分間の電気刺激,10分間の回復期間とする実験設定で計30分間連続してNAサンプリングと血管張力の測定を行った。また,α受容体の遮断薬であるPrazosin(10^<-6>M)を^1O_2曝露と同時に表面灌流し,電気刺激を開始するまで計10分間処置した。血管張力変化は張力トランスデューサーを介して,内因性NA放出量は,表面灌流液を回収しその後前処理を経てHPLCにより定量した。^1O_2の発生は光増感試薬Rose bengal(50μM)に波長550nm,照度18,000 luxの緑色光を照射し行った。^1O_2の発生量は電子磁気共鳴(ESR)法を用い,2,2,6,6-tetramethylpiperidine(TEMP)が^1O_2と反応して生じる2,2,6,6-tetramethlpiperdine-N-oxyl(TEMPO)のシグナルを指標として測定した。はじめに,用いた実験系において^1O_2が発生しているかどうかをESR法により確認した。ESR法ではRose bengal+光照射で^1O_2の発生を示す3本線のTEMPOラジカルの信号が確認され,^1O_2の消去剤として知られるL-histidine(50mM)の添加によりその信号強度は有意に減弱した。Rose bengal存在下における光照射により血管標本の静止張力およびNA放出量の増加が認められ,これらはL-histidine(50mM)の処置によりほぼ完全に消失した。次に,^1O_2が静止張力を増加させているのか,若しくは^1O_2によって放出されるNAが静止張力を増加させているのかを区別するため,α1受容体遮断薬であるPrazosin(10^<-6>M)を処置することにより検討した。^1O_2処置では,静止張力およびNA放出量はともに増加し,Prazosin処置によりその張力の増加のみが抑制された。このことにより,^1O_2曝露により放出されたNAが張力の増加を起こしていることが確認された。本研究で得られた結果より^1O_2は,静止状態での張力及びNA放出量を増加させたが,静止張力の増加はα1受容体遮断薬の処置により抑制されたことから,^1O_2はシナプス前膜に直接作用し,シナプス前膜を障害あるいはシナプス前膜性α2受容体機能を抑制し,NA放出量を増加させ,この増加したNAが血管標本の静止張力を増加させたことが示唆された。

本文研究主题的最终目标是详细分析反应性氧的物种特异性作用方式用于血管反应。去年，我们通过测量神经递质去甲肾上腺素（NA）和血管平滑肌张力来组织反应性氧的作用。今年，我们开始了一个实验，以基于基本实验来检查详细的作用方式。因此，基本目的是分析在突触前作用（作用于α受体）上表现出的单线氧（^1O_2）的特定修饰。从新西兰的一只白兔子中取出的螺旋式血管标本。将样品悬挂在表面灌注装置内的公共汽车上，并用krebs-ringer溶液灌注了用O_2充气，CO_2气体混合气体进行表面灌注，并在稳定周期后开始测量，然后进行NA采样和血管张力和血管张力测量，总测量30分钟，进行10分钟的启动，以进行10分钟的刺激，以进行10分钟的启动，并进行10分钟的启动，并进行10分钟的启动，并进行10分钟的启动，并进行10分钟的启动。另外，prazosin（10 ^<-6> m）是α受体的阻滞剂，在暴露于 ^1O_2的情况下被灌注，并总共处理10分钟，直到启动电刺激。通过张力传感器通过HPLC定量血管张力的变化，并收集内源性NA释放量并随后预处理。 ^1O_2是通过辐射光敏试剂玫瑰孟加拉（50μm）的绿光而生成的，波长为550 nm，照明量为18,000 lux。使用2,2,6,6-6,6-四甲基磷酸酯（TEMP）与 ^1O_2反应时，使用2,2,6,6-四甲基-N-氧基（TEMPO）的信号测量了产生的 ^1O_2的量。首先，我们确认在ESR方法使用的实验系统中是否生成了 ^1O_2。在ESR方法中，在用玫瑰孟加拉+光照射时证实了三条节奏自由基的信号，表明 ^1O_2的产生，并且通过添加L-齐替氨酸（50mm）（称为 ^1O_2的擦除剂），通过添加L-齐替丁（50mm）来显着降低信号强度。在存在玫瑰孟加拉的情况下，光照射显示出血管标本的静息张力和Na释放的增加，几乎通过用L-齐丁氨酸（50 mm）处理来完全消除。接下来，我们通过处理α1受体阻滞剂prazosin（10 ^<-6> m）来研究 ^1O_2是否会增加静止张力，或者 ^1O_2释放的Na是否会增加静止张力。在 ^1O_2处理中，静息张力和释放的NA量增加，而prazosin治疗仅抑制了张力的增加。这证实了 ^1O_2暴露释放的NA导致张力增加。 The results obtained in this study suggest that ^1O_2 increased tension and NA release in the resting state, but the increase in static tension was suppressed by treatment with α1 receptor blockers, and that ^1O_2 acted directly on the presynaptic membrane, impaired the presynaptic membrane or inhibited the presynaptic membrane α2 receptor function, increased the NA release, and that this increased NA increased the resting tension of血管标本。