定量RT-PCR法による乳癌骨髄微小転移の検出

定量RT-PCR法检测乳腺癌骨髓微转移

基本信息

批准号：
11770673
负责人：
井上裕子
金额：
$ 0.13万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770673/
关键词：
乳癌骨髄微小転移定量RT-PCR MUCI Keratin 19 微小転移 MUC1 Keratin19

项目摘要

(背景)乳癌の予後因子は現在,リンパ節転移の状態が最強の因子である.しかし,リンパ節転移を認めない症例からも約20%が遠隔転移をきたすという事実から,さらなる予後因子としてさまざまな癌遺伝子,癌抑制遺伝子,血管新生因子等が検討されると同時に骨髄の微小転移を検出する試みがなされてきた.しかし現在広く行われている免疫細胞学的検出方法は骨髄の穿刺個所が多く,煩雑である.そこでこの研究では,乳癌に過剰発現するたんぱくであるMUCImRNAとKeratin 19mRNAを標的として蛍光probeを使った定量RT-PCR法にて乳癌の骨髄微小転移の検出とその予後を検討した.(対象方法)平均経過観察期間3年,対象は遠隔転移を認めない手術患者40名とした.Controlとして健常人10名のMUCImRNAとKeratin 19mRNAの発現量を測定しその平均値+2×漂準偏差をcut-off値とした.術直後片側の前腸骨より骨髄を5ml穿刺吸引し,分離した単核球層から全RNAを抽出した.逆転写後,一つの蛍光probeと二つのprimerを使用して定量PCRを施行した.解析は7700 sequence detectorで行った.(結果)検出感度は乳癌細胞株MCF7を使用し,1/10^6であった.乳癌患者の骨髄中においてCut-off値以上の症例はMUCI 53% Keratin19 36%であった.Stage,腫瘍径,リンパ節の有無別にMUCI,Keratin19の定量値を検討すると,病期がすすむごとにそれらの中央値および平均値は上昇するが、分散は有意差を認めなかった.多変量解析にてリンパ節転移,腫瘍径とした従来の予後因子と比較すると微小転移の有無は独立した因子として有意差を認めた.(結論)本方法における微小転移の検出は予後予測に有意義であった.

（背景）乳腺癌最强大的预后因素是淋巴结转移的状态。但是，由于大约有20％的没有淋巴结转移的病例，已经研究了各种预后因素，并尝试检测骨髓的微分离发生，以及其他因素。但是，当前使用的免疫细胞学检测方法通常在骨髓中刺穿。因此，在这项研究中，在乳腺癌中过表达的蛋白是粘液mRNA和角蛋白。我们使用19个mRNA靶标及其预后研究了乳腺癌中骨髓微量含量的检测。（受试者方法）平均随访期为3年，40例患者是没有远处转移的受试者。作为对照，在10名健康人员中测量了粘液mRNA和角蛋白19 mRNA的表达水平，并将平均值+2 x x刻度偏差设置为截止。手术后立即将5 mL的骨髓从前裂中抽出，并从分离的单核层中提取总RNA。逆转录后，使用一个荧光探针和两个引物进行定量PCR。分析以7700序列进行。使用检测器进行检测灵敏度。（结果）使用乳腺癌细胞系MCF7，检测敏感性为1/10^6。在乳腺癌患者的骨髓中，粘膜为53％的角蛋白，36％。当根据阶段，肿瘤直径以及存在或不存在淋巴结的粘液和角膜素的定量值时，中位数和平均值随疾病的每一个进展而增加，但没有观察到方差的显着差异。在多元分析中，与传统的预后因素（例如淋巴结转移和肿瘤直径）相比，发现微量症的存在或不存在是独立的因素。（结论）使用此方法检测微量表对于预测预后是有意义的。