ヒト羊膜由来細胞株の神経系細胞への分化転換性

人羊膜来源的细胞系转分化为神经系统细胞

• 批准号: 11770615
• 负责人: 森本 昌史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770615/
• 关键词: 羊膜由来細胞株; 培養; 蛍光抗体法; 神経細胞; グリア細胞

ヒト羊膜由来細胞株(AV3)より調製した細胞浮遊液をカバースリップにのせて培養を行った。基本培地として、OPTI-MEM^<TM>培地にN2 supplement^<TM>,上皮細胞成長因子(EGF),塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)を添加したものを用いた。5日間、10日間の培養期間の後、細胞を固定し、神経幹細胞のマーカーとしてnestin、ニューロンへの分化マーカーとしてMAP-2、グリア細胞への分化のマーカーとしてGFAPの発現を螢光抗体法を用いて調べた。また、神経細胞への分化促進因子として3μMのall-trans retinoic acid(RA)やグリア細胞への分化促進因子としてグルココルチコイドを添加し同様に各種マーカーの発現を調べた。基本培地では、培養5日目にはnestin陽性を示す細胞がほとんどでその多くがGFAP陽性を示した。培養10日目にはnestin陽性を示す細胞は少なくなったが、GFAP陽性細胞の割合は増加していた。また、形態的にも敷石状のアストロサイトの形態を示す細胞が大部分で、MAP-2陽性を示す細胞はみられなかった。RAの添加で、培養5日目で約2%、培養10日目で約5%の細胞がMAP-2陽性を示した。これらの中にMAP-2陽性細胞が80%を占める細胞塊の形成もみられた。グルココルチコイドの添加によっては総細胞数の減少とGFAP陽性細胞の割合の増加が認められた。概してRAはAV3細胞株に対して神経細胞に分化させる促進因子として、グルココルチコイドはグリア細胞に分化させる促進因子としての作用があると考えられた。しかし、RAのAV3細胞株に対する神経細胞への分化誘導能は弱く、今後他の因子を含め検討が必要と考えられた。

将由人羊膜来源的细胞系(AV3)制备的细胞悬液置于盖玻片上并培养。作为基础培养基，使用补充有N2补充物、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的OPTI-MEM TM 培养基。培养5天和10天后，固定细胞，并检测作为神经干细胞标记物的巢蛋白、作为分化为神经元标记物的MAP-2和作为分化为神经胶质细胞标记物的GFAP的表达。我使用荧光抗体方法进行了测量。另外，添加3μM全反式视黄酸(RA)作为促进分化为神经细胞的因子和糖皮质激素作为促进分化为神经胶质细胞的因子，并类似地研究各种标记物的表达。基础培养基中，培养第5天大部分细胞呈巢蛋白阳性，其中不少细胞呈GFAP阳性。培养第10天，巢蛋白阳性细胞数量减少，但GFAP阳性细胞百分比增加。此外，大多数细胞呈鹅卵石样星形胶质细胞形态，未发现MAP-2阳性细胞。添加RA后，约2%的细胞在培养第5天显示MAP-2阳性，约5%在培养第10天显示MAP-2阳性。其中，还观察到80%的MAP-2阳性细胞形成细胞簇。根据糖皮质激素的添加，观察到总细胞数的减少和 GFAP 阳性细胞百分比的增加。一般来说，RA被认为是促进AV3细胞系分化为神经细胞的因子，而糖皮质激素是促进分化为神经胶质细胞的因子。然而，RA在AV3细胞系中诱导分化为神经细胞的能力较弱，认为今后有必要研究其他因素。