表皮細胞シグナル伝達と類天疱瘡抗原IIのリン酸化と病因抗体結合による水疱形成

表皮细胞信号转导和类天疱疮抗原 II 的磷酸化以及致病性抗体结合导致的水疱形成

• 批准号: 11770452
• 负责人: 野尻 麻里
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770452/
• 关键词: ヘミデスモゾーム; 180kDa類天疱瘡抗原(BPA); internalization

類天疱瘡は全身に緊満性の水疱、びらんを生じる自己免疫性疾患である。病因抗体の抗原として表皮基底細胞と基底膜を結合する接着構造(ヘミデスモゾーム)の構成分子である180kDa類天疱瘡抗原(BPA)と230kDaBPAが同定されている。本研究は類天疱瘡抗体を培養表皮細胞に作用させ、180kDaBPAが類天疱瘡IgGと免疫複合体を形成した後、その免疫複合体のinternalizationにかかわるリン酸化を主とした細胞内シグナル伝達のメカニズムを明らかにすることを目的としている。低カルシウム(0.07mM)培養表皮細胞における180kDaBPA分子の分布状態は、蛍光抗体法で細胞底面細胞膜上ではプレヘミデスモゾームとして均等微細顆粒状無構造分布で、正カルシウム(1.87mM)培地では特異な同心円状の配列をとる。一方、細胞側面上面の細胞膜上では低、高カルシウム濃度ともに遊離分子としてプールされている。このようなカルシウムシフト(低→高)において180kDaBPAの分布を蛍光染色法で確認した。また、細胞膜にプールされた180kDaBPAが類天疱瘡患者血清を加えることにより免疫複合体を形成し、細胞質内へinternalizationすることを蛍光染色法で確認した。また、カルシウムシフト、TPA(プロテインキナーゼC活性化)、H7(プロテインCキナーゼ阻害剤)などの刺激を加えることにより、同様の反応が起こることを確認した。

类天疱疮是一种自身免疫性疾病，会导致全身出现紧张的水泡和糜烂。 180kDa类天疱疮抗原（BPA）和230kDa BPA是连接表皮基底细胞和基底膜的粘附结构（半桥粒）的组成分子，已被鉴定为致病性抗体的抗原。在本研究中，我们将类天疱疮抗体应用于培养的表皮细胞，180kDaBPA与类天疱疮IgG形成免疫复合物后，我们研究了参与免疫复合物内化的细胞内信号转导机制，主要是磷酸化，目的是阐明。 。荧光抗体法测定低钙（0.07mM）培养表皮细胞中180kDaBPA分子的分布状态为细胞底部细胞膜上呈前半桥粒状的均匀细粒状无结构分布，而正常钙中呈独特的同心圆分布（ 1.87mM) 培养基。另一方面，在细胞上侧的细胞膜上，低浓度和高浓度的钙都以游离分子的形式聚集。使用荧光染色证实了在这种钙转移（从低到高）过程中 180kDaBPA 的分布。此外，通过荧光染色证实，通过添加类天疱疮患者血清，聚集在细胞膜中的180kDaBPA形成免疫复合物并内化到细胞质中。我们还证实，通过施加钙转移、TPA（蛋白激酶 C 激活）和 H7（蛋白 C 激酶抑制剂）等刺激，会发生类似的反应。