AAVベクターによる神経細胞へのドーパミン合成関連酵素の多重遺伝子導入の長期効果-導入遺伝子の長期発現とドーパミンによる細胞毒性についての検討-

使用 AAV 载体将多巴胺合成相关酶的多个基因转移到神经元中的长期效果 - 检查导入基因的长期表达和多巴胺诱导的细胞毒性 -

• 批准号: 11770333
• 负责人: 静間 奈美
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770333/
• 关键词: 遺伝子治療; アデノ随伴ウイルス; パーキンソン病; チロシン水酸化酵素; 芳香族アミノ酸脱炭酸酵素; GTPシクロヒドロラーゼI; ドーパミン; GTPシクロヒドロラーゼ1; テトラヒドロビオプテリン

パーキンソン病に対する遺伝子治療法を開発するため、神経細胞へ安全かつ効率良く遺伝子導入できるアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用いた研究を進めた。ドーパミン合成に必要な三種類の酵素、即ち、L-ドーパ合成を触媒するチロシン水酸化酵素(TH)、L-ドーパからドーパミンへの変換に必要な芳香族アミノ酸脱炭酸酵素(AADC)、及びテトラヒドロビオプテリン(THの補酵素)合成の律速酵素であるGTPシクロヒドロラーゼI(GCH)の各遺伝子を搭載したAAVベクター(AAV-TH、AAV-AADC及びAAV-GCH)を作製し、パーキンソン病のモデル動物の線条体に注入する実験を行った。前年度より検討を継続しているモデルラット(黒質線条体路を6-hydroxydopamineで破壊して作製)を用いた実験では、導入遺伝子の線条体における発現は18ヶ月後にも認められ、apomorphine投与後の異常回転運動に対する治療効果も持続していることを確認した。今年度はさらに、MPTPを慢性投与して薬剤性パーキンソニズムを発症させたモデルサルに上記の三種類のAAVベクターを片側の被殻に注入しその効果を検討した。運動機能の評価では対側の上下肢の運動障害の改善効果が認められた。被殻のドーパミン受容体過敏性をapomorphine投与によって検討したところ体幹の回転するような姿勢が認められ、ベクター注入側におけるドーパミン受容体過敏性の改善効果と考えられた。ベクター注入5週間後に行った免疫組織化学的検討では被殻の広い範囲で各遺伝子の発現が確認された。以上より、AAVベクターを応用して線条体内でドーパミンを直接合成させる遺伝子治療は、パーキンソン病の新しい治療法として期待される。

为了开发帕金森氏病的基因治疗，我们使用Adeno -Accompanying病毒（AAV）载体进行了研究，可以安全有效地引入神经细胞。多巴胺合成所需的三种类型的酶，即酪氨酸氢氧化物（Th），催化剂L-DOPPA合成，芳族氨基酸液压药物（AADC），四氢烷和四氢配备了GTP环酶I（GCH）的每个基因（GCH），这是Biopterine（Th's Ezyme）合成的比例，以创建用于帕金森氏病的模型动物。在使用自上一年以来一直在研究的模型大鼠的实验（由6-羟基多巴胺用6-羟基多巴胺破坏和产生），在18个月后认识到入门基因丝体中的表达。给予阿哌丁碱后的异常旋转运动也保持了。今年，将上述三种AAV矢量注入了一个侧面，该模型成长于长期发展MPTP并开发了基于药物的帕金森氏症以检查效果。对相反上肢的运动障碍改善运动功能的评估被认可。当通过阿哌汀检查葫芦的多巴胺受体时，识别旋转躯干的态度，被认为是改善载体注射侧多巴胺受体易怒的作用。五周后，向量注射载体，免疫有机研究证实了每个基因在壳的广泛区域中的表达。从以上，将AAV载体直接合成电线中的多巴胺的遗传处理将是帕金森氏病的新治疗方法。

项目成果

藤本健一,佐山節子,静間奈美,狩野操,中野今治: "経頭外的磁気刺激検査にて皮質内抑製機構を経時的に観察した臨床診断corticobasal degenerationの1例."臨床神経. 40. 701-706 (2000)

Kenichi Fujimoto、Setsuko Sayama、Nami Shizuma、Misao Kano、Imabari Nakano：“一例临床诊断的皮质基底节变性，其中使用经颅外部磁刺激测试观察到皮质内抑制机制。”40. 701 -706。 2000）

佐山節子,藤本健一,静間奈美,中野今治: "習慣性顎関節脱臼を併発したパーキンソニスム病の2例."臨床神経. 39. 849-851 (1999)

Setsuko Sayama、Kenichi Fujimoto、Nami Shizuma、Imabari Nakano：“两例帕金森病并发习惯性颞下颌关节脱位。” 39. 849-851 (1999)。

藤本健一,佐山節子,静間奈美,中野今治: "バルプロ酸単独投与により可逆性の無動状態を呈した1例."神経内科. 52. 101-106 (2000)

Kenichi Fujimoto、Setsuko Sayama、Nami Shizuma、Imabari Nakano：“单独使用丙戊酸引起的可逆性不动病例”52. 101-106 (2000)。