ブタ精子のキャパシテーション過程での頭部間凝集に及ぼすカルシウムの影響

钙对猪精子获能过程中头对头聚集的影响

基本信息

批准号：
11760194
负责人：
原山洋
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

実験1.カルモジュリン(CaM)の役割:既報(Chan and Dukelow,1985;Leclerc et al.,1990,1992)によると,精子におけるCaM濃度およびCaMの特異タンパク質への結合性はキャパシテーションとともに低下することから,CaMはキャパシテーションに抑制的に作用していると推察されている.そこで,本研究では成分からキャパシテーション誘起因子を除去した媒液中で精子をインキュベートした際のCaM阻害剤の影響について検討した.予備実験においてCalmidazoliumとTrifluoperazineを用いたが,これらの薬剤は精子に対する毒性が強く,本実験での使用には不適切であった.そこで,比較的毒性の低かったW7(5〜10μM)を用いたところ,頭部間凝集精子率は著しく上昇した.この結果から,CaMは精子の頭部間凝集に抑制的に作用していると考えられる.実験2.電位依存性カルシウムチャンネル(VDCCs)の役割:昨年度の研究において10〜100μMの濃度では精子の頭部間凝集に有意な抑制作用を示さなかったL型VDCCs阻害剤のNifedipineとNitrendipineをより高い濃度(1mM)で添加したところ,頭部間凝集率は有意に低下した.他方,T型VDCCsの役割については,予備実験で精子に対する毒性が比較的少ないことが判明した阻害剤のPimozideとAmiloride(いずれも0.1〜10μM)を用いて検討したが,いずれも凝集精子率に有意な変動は認められなかった.以上の結果から,精子の頭部間凝集の発生においてVDCCsが機能している可能性が示唆されたが,L型阻害剤で抑制効果が認められた濃度は1mMと高く,またT型阻害剤(0.1〜10μM)には効果が認められなかったことから,VDCCsの種類を特定するには至っていない.

实验1。钙调蛋白（CAM）的作用：先前报道（Chan和Dukelow，1985; Leclerc等人，根据Al。，1990，1992），CAM浓度和CAM与特定蛋白质的浓度随电容的降低，并且估计CAM对电容性具有抑制作用。因此，在这项研究中，在研究了从组件中去除电容诱导的因子的培养基中孵育精子时的CAM抑制剂的作用。在初步实验中，使用了Calmidazolium和Trifluoperazine，但这些药物对精子有剧毒，不适合在该实验中使用。因此，当使用W7（5-10μM）（相对较低的毒性）时，头间聚集速率显着提高。从这个结果，可以认为CAM抑制精子的头间聚集。实验2。电压依赖性钙通道（VDCC）角色：硝基胺和硝基胺，L型VDCC的抑制剂在较高浓度（1 mm）的浓度（1 mm）中，对10-100μm的浓度的精子浓度没有显着抑制作用，并重新添加了均衡的聚集率。另一方面，关于T型VDCC，Pimozide和Amil抑制剂的作用，在初步实验中，它们对精子的毒性相对较小。尽管使用了奥德斯（均为0.1-10μm），但在任何一种情况下，均未观察到聚集精子速率的显着变化。上述结果表明，VDCCS可能在精子的插界聚集的发展中起作用，但是L型抑制剂的抑制作用浓度很高，在1 mm处很高，并且在T型抑制剂（0.1-10μm）中未观察到效果，因此我们无法识别VDCC类型的类型。