CD6^+γδT細胞による副腎クロマフィン細胞の刺激と神経細胞への形質転換

CD6^+γδT细胞刺激肾上腺嗜铬细胞并转化为神经元

• 批准号: 11760199
• 负责人: 今野 明弘
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760199/
• 关键词: ウシ; CD6; CD6 ligand; ALCAM; CD166; γδTリンパ球; 自律神経; 接着分子; γST細胞; 交感神経

脾臓組織cDNAを鋳型にしてPCRクローニングを行い、現在までに、翻訳領域の5'末端36塩基と3'末端21塩基を除く2つのウシCD6アイソフォーム(boCD6a 1653塩基;boCD6b 1470塩基)cDNAのシークエンスを終了した。ウシCD6結合分子については、免疫組織化学的研究によって、ヒトCD6結合細胞が高密度に分布していた交感神経節(頚胸神経節)のcDNAを鋳型にして、同様にPCRクローニングを行い、ウシALCAMの全翻訳領域(1749塩基)の配列を決定した。次に、CD6およびALCAMの両結合部位をヒト、マウス、ウシで比較し、結合に必要不可欠な配列がウシにおいても完全に保存されていることを確認した。さらに、ヒトCD6結合細胞が存在した組織(大脳軟膜、延髄、胸髄、頚胸神経節、副腎髄質、胸腺、脾臓、リンパ節)におけるウシALCAMの発現をRT-PCR法によって研究し、同組織にはALCAM mRNAが発現していることを明らかにした。以上の結果から、ウシ組織上のヒトCD6結合分子はALCAMであり、ウシのCD6とALCAMが結合可能であると考えられた。また、ウシ脾臓単核細胞分画cDNAを鋳型にしてウシNGF特異的プライマーを用いてPCRを行い、同分画中にNGF mRNAの発現を確認した。抗ウシNGFポリクローナル抗体、抗ウシγδTリンパ球抗原受容体(TcR)モノクローナル抗体(mAb)および/または抗ウシCD6 mAbを一次抗体とした組織蛍光抗体2重染色法では、脾臓のCD6^+γδTリンパ球の細胞質中にNGFの免疫活性が確認された。これらの結果から、CD6^+γδTリンパ球はALCAM^+交感神経終末に脾臓組織中で接着するとともに、NGFを分泌し、交感神経の成長・維持に関わることが示唆された。

以脾组织cDNA为模板进行PCR克隆，迄今为止，我们已经对两种牛CD6亚型（boCD6a 1653个碱基；boCD6b 1470个碱基）的cDNA进行了测序，不包括5'端的36个碱基和3'端的21个碱基。 ' 翻译区域结束。对于牛CD6结合分子，通过免疫组织化学研究发现，以人CD6结合细胞密集分布的交感神经节（颈胸神经节）的cDNA为模板，同样地进行了PCR克隆。对 ALCAM 的整个翻译区域（1749 个碱基）进行了测序。接下来，我们比较了人类、小鼠和牛中CD6和ALCAM的结合位点，并证实了结合所必需的序列在牛中是完全保守的。此外，我们通过 RT-PCR 研究了存在人 CD6 结合细胞的组织（软脑膜、延髓、胸脊髓、颈胸神经节、肾上腺髓质、胸腺、脾脏和淋巴结）中牛 ALCAM 的表达，结果表明： ALCAM mRNA 表达于从以上结果可以认为，牛组织上的人CD6结合分子是ALCAM，并且牛CD6和ALCAM可以结合。另外，以牛脾单核细胞级分cDNA为模板，使用牛NGF特异性引物进行PCR，确认了级分中NGF mRNA的表达。使用抗牛 NGF 多克隆抗体、抗牛 γδ T 淋巴细胞抗原受体 (TcR) 单克隆抗体 (mAb) 和/或抗牛 CD6 mAb 作为一抗进行组织荧光抗体双染，结果显示脾 CD6^+ γδ T淋巴细胞球体的细胞质中证实了 NGF 免疫反应性。这些结果表明CD6^+γδT淋巴细胞粘附于脾组织中的ALCAM^+交感神经末梢，分泌NGF，并参与交感神经的生长和维持。

项目成果

Konno, A., Ahn, J-S., Kitamura, H., Hamilton, M.J., Gebe, J.A., Aruffo, A., Davis, W.C.: "Tissue distribution of CD6 and CD6-ligand in cattle : Expression of the CD6-ligand (ALCAM, CD166) in the autonomic nervous system of cattle and the human."Journal of

Konno, A.、Ahn, J-S.、Kitamura, H.、Hamilton, M.J.、Gebe, J.A.、Aruffo, A.、Davis, W.C.：“CD6 和 CD6-配体在牛中的组织分布：CD6-配体的表达