有毒キノコ種の分子マーカーによる識別

利用分子标记鉴定有毒蘑菇种类

• 批准号: 11760119
• 负责人: 玉井 裕
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760119/
• 关键词: 毒キノコ; PCR; IGS; RFLP; RAPD

1.菌株の収集北海道内において中毒例の報告されている種、またはその近縁種を採取し、形態観察による種の同定、標本作製および菌株分離を行った。採取したキノコの系統数は以下の通りである。ベニタケ属(6種15系統)、チチタケ属(5種18系統)、テングタケ属(3種15系統)、カヤタケ属(3種11系統)、クリタケ属(3種15系統)、スギタケ属(3種9系統)、アセタケ属(2種5系統)、イッポンシメジ属(3種12系統)、イグチ属(2種6系統)、カラカサタケ属(2種4系統)、ヌメリイグチ属(4種12系統)、モエギタケ属(2種5系統)、フウセンタケ属(4種8系統)、サマツモドキ属(2種7系統)、フクロタケ属(3種6系統)、ウラベニガサ属(3種8系統)、以上50種156系統。2.分子マーカーの検索上記において採取したキノコ種を、属内において有毒種と可食(または無毒)種とを識別することを目的として、PCR用テンプレートDNAの抽出条件および、PCR法によるリボソームRNA遺伝子のIGS領域の増幅条件を検討した。テンプレートDNAは、生子実体、アルコール浸漬標本および凍結乾燥標本のいずれからもTEバッファー中で100℃、10分間の煮沸抽出処理により調製可能であることが明らかとなった。得られたテンプレートを用いてIGS領域の増幅を行い、500〜700ベースの増幅物を得たが、非特異的なバンドの出現が幾つかの系統に認められた。IGS領域長には特に明確な種特異性は認められなかった。更に、IGS領域PCR増幅物に対して、DdeI、AluI等の制限酵素を用いてRFLPパターンを取得し、種間比較を行ったが、供試菌株群については単独酵素処理による有毒種の識別は困難であった。属毎に供試菌株を増やして、生物学的種との対応も考慮しつつ、更に検討してゆく必要性があると考えられた。

1。菌株的收集：在北海道收集了具有报告中毒病例或相关物种的物种，并通过形态学观察，标本制备和菌株隔离来鉴定物种。收集的蘑菇数量如下：Rossica（6种，15种菌株），Chichitake（5种，18种菌株），Amanita属（3种，15种，15种菌株），Kayatake（3种，11种，11种菌株），Kuritake，Kuritake（3种，15种，15种，15种菌株，3菌株），Temgitake（3，9种，3种），Sugitains（3种），Sugitake（3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3种，3株菌株），ipponshimeji（3种，12种菌株），iguchi（2种，6种菌株），karakasatake（2种，4种，4种菌株），Slurpberry（4种，12种菌株），Moegitake（2种，5种，5种，5种菌株），fusentake（4种，8种，8种菌株），Sweetfers（4种，Sweetfish（4种），Sweetfish（4种），4种，4种，4种，4种（4种，4种，4种，4种，4种，4种，4种，4种，4种，4种（4种）菌株），甜鱼（2种，6种菌株），urabenikusa（3种，8种菌株），156种50种菌株。 2。搜索分子标记以区分属内的有毒和可食用（或无毒）物种，PCR模板DNA的提取条件以及通过PCR方法的核糖体RNA基因的IGS区域的扩增条件。据揭示，可以通过在100°C煮沸提取处理，在TE缓冲液中煮沸10分钟，可以从活结实物体，酒精浸泡的标本和冻干标本中制备模板DNA。所得的模板用于放大IGS区域以获得500-700个碱基的放大，并在几种菌株中观察到非特异性带的出现。在IGS区域的长度中未观察到特殊的特异性。此外，使用限制性酶（例如DDEI和ALUI）获得了IGS区域PCR扩增的RFLP模式，并比较了种间，但是很难通过单个酶处理来区分测试菌株中的有毒物种。人们认为，考虑到与生物物种的对应关系，需要增加每个属的测试菌株数量，并进一步考虑结果。