免疫化学的手法によるゼラチン質プランクトン捕食魚類の食性研究

免疫化学方法研究胶状浮游生物捕食性鱼类摄食习性

基本信息

批准号：
11740426
负责人：
西川淳
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740426/
关键词：
ゼラチン質プランクトン免疫化学的手法魚類食性

项目摘要

1.ゼラチン質プランクトン抗体の作製:刺胞動物3種と被嚢動物4種を採集後,体の一部または消化管内容物を除いた体全体をホモジナイズし,遠心分離(20800G,30分)を行ない蛋白抽出液(抗原)を得た.抽出液とFreundの完全アジュバンド(FCA)を1:1で混合したエマルジョンを作成し,ウサギの皮下に注射した.オクタローニー法によりウサギ血中の抗体価の上昇を確認した上で,採血を行ない血清を分離した.プロテインAカラムにより抗体(IgG)を精製し,その一部に対してビオチンを結合させ,酵素免疫学的手法による分析に用いた.得られた抗体はオクタローニー法により抗原のゼラチン質プランクトンとは明瞭な反応を示し、抗体の作製に成功したことが確認された.2.ウエスタンプロッティングによる特異性の確認:得られた抗体の特異性を確認するため,抗原以外の様々な動物プランクトン(カイアシ類,オキアミ類,ヤムシ類,エビ類,魚類など非ゼラチン質動物プランクトンとゼラチン質プランクトン数種)の蛋白質試料を作成し,SDS-PAGEの後,PVDF膜に転写し,酵素抗体法(ABC法)により交叉反応の有無を調べた.交叉反応は刺胞動物ではAtollaとPeriphyllaで,被嚢動物では4種すべての間で見られた.また,刺胞動物と被嚢動物との間には認められなかった,さらに,甲殻類など他の動物群の蛋白に対しては,すべての抗体で交叉反応はみられなかった.以上のことから,用いた抗体は少なくとも他の動物群と刺胞動物,被嚢動物の識別には利用できると考えられる.3.魚類および端脚類を用いた食性判定:大槌湾で採集されたマンボウおよび浮遊性端脚類数種を用いて、開発した抗体を用いた免疫染色を行った。マンボウの消化管内容物はいずれの抗体にも染まらなかったが、浮遊性端脚類の特にタルマワシ類では、被嚢類由来の抗体に明確に反応が出たことから、これらの端脚類が被嚢類を利用しているということが確認された。採集時に得られた試料は被嚢組織の研究、ならびに大型動物プランクトンの分布研究にも用いられた。

1.胶状浮游生物抗体的制备：收集3种刺胞动物和4种被囊动物后，将除去消化道内容物的身体的一部分或全身均质化，并离心（20800G，30分钟）进行蛋白提取。将提取物与弗氏完全佐剂(FCA)以1:1的比例混合，得到乳剂，将乳剂皮下注射到家兔体内，检测家兔血液中抗体效价的增加。奥克特洛尼检查方法。之后，采血并分离血清。使用蛋白A柱纯化抗体（IgG），其一部分与生物素结合，用于酶免疫法分析。获得的抗体与2.通过Westernplotting确认特异性：确认所得抗体的特异性。制备除抗原以外的各种浮游动物的蛋白质样品（非凝胶状浮游动物和几种类型的凝胶状浮游生物，例如桡足类、磷虾、毛毛虫、虾和鱼）并通过SDS-PAGE进行分析。然后，将样品转移到PVDF膜上，使用酶联抗体测定法（ABC法）调查有无交叉反应性。在刺胞动物和所有动物中，在Atolla和Periphylla中观察到了交叉反应性。四种被囊动物，还有荆棘。在囊泡和被囊动物之间没有观察到交叉反应性，并且没有观察到与来自其他动物群体（例如甲壳类动物）的蛋白质的任何抗体的交叉反应性。检测到的抗体至少与其他动物群体相容。据认为，它可以用于识别水泡和被囊动物。 3.使用鱼类和片足类动物进行饮食测定：开发了一种使用大槌湾收集的翻车鱼和几种浮游片足类动物进行免疫染色的方法。翻车鱼的胃肠道内容物没有被任何抗体染色，但浮游片足类动物，尤其是鞑靼类，明显与来自被囊类动物的抗体发生反应，这表明这些片足类动物被证实使用被囊类动物。收集过程中获得的样本也用于研究包囊组织和大型浮游动物的分布。