プロテオグリカン、PG-Mが示す抗-細胞接着活性のシグナル伝達機構

蛋白多糖PG-M抗细胞粘附活性的信号转导机制

基本信息

批准号：
10780372
负责人：
高木秀和
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの実験からアネキシンVIを発現する細胞、およびアネキシンVIを強制発現させたトランスフォーマントはコンドロイチン硫酸鎖と特異的に結合すること、アネキシンVIが細胞表面に存在することより、アネキシンVIがコンドロイチン硫酸鎖のレセプター様分子として機能することを報告してきた。しかし、これまではアネキシンVIとコンドロイチン硫酸鎖が直接結合していることを調べることが出来なかった。そこでBead法を用い、コンドロイチン硫酸鎖とアネキシンVIが直接結合しうるかを検討した。フィブロネクチンをコートしたBeadではインテグリンの他、細胞内情報伝達に関わる様々な分子も集積したが、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンPG-MをコートしたBeadには予想に反し、レセプターとして機能すると考えたアネキシンVIの集積を観察察することが出来なかった。元々、コンドロイチン硫酸鎖とアネキシンVIの結合力は弱いため、この手法では解析することが困難であるのかもしれない。またコンドロイチン硫酸鎖が示す抗-細胞接着を打ち消す薬剤を探すため、種々のキナーゼの阻害剤(HA1004,KT5823,KT5926、Calphostin C,PMA,Bombesin,Genistein)、細胞増殖因子(EGF,bFGF)、細胞骨格に影響を与えるLPAなどを用いて検討したが、いずれも影響がなかった。このことはコンドロイチン硫酸鎖が示す抗-細胞接着活性は細胞内情報伝達に影響を与えるというより、むしろ細胞膜の状態を変えることで細胞接着を阻害することを示唆しているのかもしれない。現在、コンドロイチン硫酸鎖とアネキシンVIが直接結合しているかどうかを検討するため、光架橋剤やGFPを用いた手法で検討中である。

从过去的实验中表达焦虑症的细胞，迫使焦虑症VI与软骨素硫酸盐链结合，而Anexin VI的转化因素在细胞表面，而Anexin VI是据报道的软骨素硫酸。它充当链的受体样分子。但是，到目前为止，还无法发现膜联蛋白VI和软骨素硫酸盐链直接结合。因此，使用珠子方法，我们检查了是否可以直接连接硫酸软骨蛋白链和焦虑素VI。珠子是一种纤连蛋白的外套，也积累了与细胞内信息传播相关的各种分子，但是在硫酸盐软骨蛋白硫酸盐PG-M上，珠子与期望相反，并且被认为是受体的作用。最初，在这种方法中，可能难以分析硫酸软骨链和焦虑VI之间的结合力。为了寻找取消硫酸软骨蛋白链指示的抗细胞粘附的药物，各种激酶抑制剂（HA1004，KT5823，KT5926，KT5926，Calphostin C，PMA，PMA，Bombesin，Bombesin，Genastein，细胞增殖因子（EGF，BFGF）（EGF，BFGF）（EGF，BFGF）（EGF，BFGF）（EGF，BFGF）我们考虑使用影响骨骼的LPA，但它们都没有效果。这可能表明，硫酸软骨素指示的抗细胞粘附活性通过改变细胞膜的状况而不是对细胞内信息传播的影响来抑制细胞胶。当前，我们正在考虑使用轻桥或GFP来考虑硫酸软骨蛋白链和焦虑VI是否直接结合。