間葉系細胞由来のPDGFが網膜神経節細胞の神経突起再生能に及ぼす影響について

间充质细胞PDGF对视网膜神经节细胞神经突再生能力的影响

• 批准号: 09771475
• 负责人: 溝渕 宗秀
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771475/
• 关键词: 網膜神経節細胞; 神経栄養因子; PDGF β gene; PDGF gene; 神経突起伸長率; 細胞生存率

昨年確立させた培養細胞の実験系を用いて、培養液にNGF(100ng/ml)、BDNF(l00ng/ml)を加えて、網膜神経節細胞の細胞生存率と神経突起伸長率を測定したところ、両神経栄養因子とも、有意に増大させた。中枢神経系の網膜神経節細胞において、NGF、BDNFがニューロンの分化促進・生存維持作用を示すことが確認できた。また間葉系細胞の増殖因子で神経細胞にも発現しているPDGF-BB(10ng/ml)について同様に検討したが、有意な結果は得られなかった。しかしラット小脳細胞ではPDGFにより生存日数の延長や神経突起の延長が報告されており、再度検討する必要がある。また培養液にNGF、BDNF、PDGF-BBを加え、どのような遺伝子が発現しているかアイソトープ標識のプローブを用いたin situ hybridization法により検討した。PDGFβ receptorgene、PDGF gene、c-fos、 c-iun、trkBが発現しているか否か検討した。その結果、私の実験系では、NGF、BDNF、PDGF-BB投与によりPDGFβ receptor gene、PDGF gene、c-fos、c-jun、trkBの発現は観察されなかった。しかし、プローブのラベルにむらがあることやin situhybridizationの処理過程において細胞が脱落するという技術的な問題、網膜神経節細胞の数が少ないことなどの検討課題がいくつかあり、これらの課題を解決してから、再度検討する必要がある。今後は、RT-PCR法の採用を含め実験的手法の変更を検討している。

利用去年建立的培养细胞实验体系，在培养液中添加NGF（100ng/ml）和BDNF（100ng/ml），测定视网膜神经节细胞的细胞存活率和神经突生长率，两种神经营养因子均显着升高。增加。已证实NGF和BDNF促进中枢神经系统视网膜神经节细胞的神经元分化并维持存活。 PDGF-BB（10ng/ml）是间充质细胞的生长因子，也在神经细胞中表达，也进行了类似的研究，但没有获得显着的结果。然而，有报道称PDGF可以延长大鼠小脑细胞的存活时间并延长神经突，因此这需要重新检查。我们还在培养液中添加了 NGF、BDNF 和 PDGF-BB，并使用同位素标记探针通过原位杂交研究了哪些基因表达。我们检查了PDGFβ受体基因、PDGF基因、c-fos、c-iun和trkB是否表达。结果，在我的实验系统中，在给予NGF、BDNF或PDGF-BB后，没有观察到PDGFβ受体基因、PDGF基因、c-fos、c-jun或trkB的表达。但有几个问题需要考虑，比如探针标记不均匀、原位杂交过程中细胞脱落等技术问题、视网膜神经节细胞数量少等，这些问题都需要解决。需要再考虑一下。未来我们正在考虑改变实验方法，包括采用RT-PCR。