遺伝子治療を併用した緑内障濾過手術の開発

青光眼滤过手术联合基因治疗的进展

基本信息

批准号：
09771463
负责人：
雑賀司珠也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、トランスフォーミング成長因子β1(以下TGFβ1)の発現をアンチセンスデオキシオリゴヌクレオチド(以下ASDON)で抑制することにより、緑内障濾過手術後の過剰な瘢痕化を抑制し、その手術予後を改善することを目的とした。本年度は、培養細胞による実験を中心に、一部、病理組織による研究も行った。培養ヒト眼テノン嚢線維芽細胞は、TGFβ1非添加でも、基礎的分泌としての結合組織産生が確認されたので、この基礎分泌を、TGFβ1ASDONで、抑制することは困難との結論を得た。そこで、TGFβ1による培養嚢線維芽細胞の細胞外マトリックス代謝の変化を検討し、細胞外へのコラーゲン、ファイブロネクチンの亢進と細胞層への沈着増加を確認し、同時に基底膜成分ラミンンは影響されないことを見いだした(投稿中)。予備実験として、結合組織成分を転写レベルで抑制するγインターフェロンをTGFβ1刺激細胞に添加すると、コントロールレベル以下にまで、結合組織産生を抑制したことから(投稿中)、同刺激細胞を培養条件下での創傷モデルとして使用し、次年度の研究に入る。一方、眼結膜局所の瘢痕化での結合組織代謝を研究する目的で、ヒト臨床材料や動物眼を用いて結合組織成分、TGFβ1などの成長因子、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)を標的として、病理組織標本による免疫組織化学、in situハイブリダイゼイションを行った。結合組織代謝、成長因子発現の亢進を確認し、うち、MMPの発現亢進を報告した。以上のように、この結合組織代謝の亢進には、TGFβ1の発現亢進が関与していると考えられた。次年度の動物眼で結膜下瘢痕へのTGFβ1ASDON実験のための基礎データを得た。

在这项研究中，我们利用反义脱氧寡核苷酸（ASDON）抑制转化生长因子β1（TGFβ1）的表达，以抑制青光眼滤过手术后过度疤痕形成，改善手术预后。今年，我们重点进行了利用培养细胞的实验，同时也进行了一些利用病理组织的研究。由于即使不添加TGFβ1，在培养的人眼特农氏囊成纤维细胞中也确认了作为基础分泌物的结缔组织产生，因此得出结论，难以用TGFβ1ASDON抑制该基础分泌物。因此，我们研究了TGFβ1引起的培养的荚膜成纤维细胞的细胞外基质代谢的变化，并证实细胞外的胶原蛋白和纤连蛋白增加并沉积在细胞层中，但同时发现基底膜成分层粘连蛋白没有受到影响。目前正在发布）。作为初步实验，当将在转录水平抑制结缔组织成分的γ干扰素添加到TGFβ1刺激的细胞中时，结缔组织的产生被抑制至低于对照水平（目前已提交），将用作伤口模型。明年进行研究。另一方面，为了研究眼结膜局部疤痕中的结缔组织代谢，我们使用人体临床材料和动物眼睛来靶向病理组织中的结缔组织成分、TGFβ1等生长因子和基质金属蛋白酶（MMP）。使用标本进行免疫组织化学和原位杂交。结缔组织代谢和生长因子表达增加，其中 MMP 表达增加。如上所述，TGFβ1 表达的增加被认为与结缔组织代谢的增加有关。我们获得了明年动物眼结膜下疤痕TGFβ1ASDON实验的基础数据。