脳腫瘍に対する遺伝子変異ヘルペスウイルスを用いたin situワクチン療法の開発

使用基因突变的疱疹病毒开发针对脑肿瘤的原位疫苗疗法

基本信息

批准号：
09771058
负责人：
戸田正博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、悪性腫瘍に対する免疫療法の研究、開発が非常に進み、とくに現在まで米国で認可された癌遺伝子治療プロトコールの多くは、各種サイトカイン遺伝子を用いた抗腫瘍免疫療法である。しかしin vivoにおける遺伝子導入効率の優れたベクターがなかったなどの理由により、これまでほとんどの腫瘍ワクチン療法プロトコールは、ex vivoアプローチであった。そこで本研究では単純ヘルペスウイルス(HSV)ベクターを用いて、サイトカイン遺伝子を腫瘍内に直接導入することにより、抗腫瘍免疫を誘導するin situ腫瘍ワクチン療法の開発を行なった。導入遺伝子であるIL-12は、p35およびp40の二つの遺伝子をCMVプロモーター下にinternalribosome entry site(IRES)を用いてamplicon plasmidに組み込んだ。Defective HSV vectorは、ヘルパーウイルスとして選択的複製型の変異HSV、G207(ICP6遺伝子内1ac Z遺伝子挿入およびICP34.5遺伝子内欠損)を用いて作製した。マウス両側腹部皮下腫瘍モデルを作製し、defective HSV vectorを片側腫瘍内に投与したところ、投与側のみならず反対側の遠隔腫瘍に対しても、著明な増殖抑制効果が認められた。その効果はヌードマウスにおいて著明に減少したことより、T細胞の強い関与が示唆された。組織学的解析より、反対側腫瘍内にリンパ球浸潤を認めたが、変異HSVによる明らかな1ac Z遺伝子発現は認められなかった。さらに脾細胞の解析により、腫瘍抗原に特異的な細胞障害性T細胞の誘導が認められた。以上より、腫瘍内defective HSV vector投与によりin situで腫瘍特異的免疫の誘導が可能であることが示された。

近年来，针对恶性肿瘤免疫疗法的研究和开发已经显着进展，迄今为止，在美国批准的许多致癌基因治疗方案都是使用各种细胞因子基因的抗肿瘤免疫疗法。但是，由于缺乏体内基因转移效率出色的向量，大多数肿瘤疫苗治疗方案一直是体内方法。因此，在这项研究中，我们开发了一种原位肿瘤疫苗疗法，该疗法通过使用单纯疱疹病毒（HSV）载体将细胞因子基因直接引入肿瘤来诱导抗肿瘤免疫。转基因IL-12，使用CMV启动子下的Internerribosomosemos入口位点（IRES）将两个基因p35和p40掺入扩增子质粒中。使用有选择性的复制突变体HSV，G207（ICP6基因中的1ac Z基因插入和ICP34.5基因中的缺失）作为辅助病毒生成缺陷的HSV载体。制备了双侧双侧皮下肿瘤的小鼠模型，并在肿瘤的一侧施用缺陷的HSV载体，并且不仅在给药侧，而且在对侧侧面较远的肿瘤上观察到显着的抑制作用。裸鼠的效果显着降低，表明T细胞的强烈参与。组织学分析表明，对侧肿瘤内淋巴细胞浸润，但没有观察到由于突变HSV而引起的1AC Z基因表达。此外，脾细胞分析表明，诱导了针对肿瘤抗原的细胞毒性T细胞。从以上表明，肿瘤内缺陷的HSV载体给药可以诱导原位肿瘤特异性免疫。