日光性弾力線維症におけるメイラード反応後期生成物の免疫電顕による局在検討

使用免疫电子显微镜定位日光弹性组织中的晚期美拉德反应产物

• 批准号: 09770643
• 负责人: 萱島 研一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770643/
• 关键词: Actinic elastosis; Maillard反応後期生成物; 免疫電顕; Photoaging; Maillard 反応後期生成物

先ず、Maillard反応後期生成物(以下、AGEsと略)の人生検材料における分布を、免疫電顕法を用いて検討した。一次抗体として、抗AGEs抗体(6D12).抗elastin抗体を用い、二次抗体としでは、15-nmもよび6-nm金コロイド標識抗マウスIgG抗体を用い、二重染色を行った。生検材料は、-4℃で固定、LR White resinに包埋した。高齢者露光部(顔面)における、elastotic degenerated fiberのamorphousおよびfibrous formでの比較では、前者においては、高電子密度(日光老化に伴って増加してくる)部分にはAGEsが、低電子密度の部分にはelastinが分布していた。後者では、両者が混在する形で分布していた。ただし、高電子密度の部分にAGEsが分布している点は共通であった。Grenzzoneでは、AGEs.elastinともに明らかな分布は認められなかったが、actinic elastosis領.域での線維芽細胞では、AGEsの散在的な分布を認めた。また、表皮レベルでもAGEsの軽度の分布を認めた。しかし、膠原線維においては、AGEsの分布はわずかしか認められなかった。動物モデルでの検討では、マウスに紫外線照射し、時間経過をおって先ず光顕レベルで観察した。しかしながら、UV-A、UV-B、UV-A+B照射群いずれにおいても明らかな日光弾性線維症を認めることができなかった。これまでは、AGEsの細胞での存在は確認されていなかったが、最近、細胞での存在の可能性も示唆されてきており、今回使用した抗体6D12以外の抗体を用いて、さらに検討する予定である。また、マウスでの日光弾性線維症モデルが確立できなかった原因は不明であるが、紫外線以外の要因が関与している可能性も考えられ、今後、紫外線と種々の因子を組み合わせて、さらに検討していく予定である。

首先，我们使用免疫电子显微镜研究了晚期美拉德反应产物（以下简称AGE）在人体活检标本中的分布。使用抗 AGEs 抗体 (6D12) 和抗弹性蛋白抗体作为一抗，并使用 15 nm 和 6 nm 胶体金标记的抗小鼠 IgG 抗体作为二抗进行双染色。将活检材料在-4℃下固定并包埋于LR White树脂中。老年人暴露部位（面部）弹性变性纤维的无定形和纤维状的比较表明，前者，AGEs存在于电子密度较高的区域（随着日光老化而增加），而AGEs则存在于电子密度较高的区域。弹性蛋白分布在该区域。在后一种情况下，两者以混合方式分布。然而，共同的特点是AGEs分布在电子密度高的区域。在Grenzzone中，没有观察到AGE或弹性蛋白的明确分布，但在光化性弹性变性区域的成纤维细胞中，观察到AGE的分散分布。在表皮水平也观察到轻微的 AGE 分布。然而，在胶原纤维中仅观察到少量 AGE 分布。在一项动物模型研究中，小鼠接受紫外线照射，并使用光学显微镜观察一段时间。然而，在UV-A、UV-B和UV-A+B照射组中均未观察到明显的日光弹性组织变性。到目前为止，细胞中是否存在AGEs尚未得到证实，但最近有人提出了细胞中存在AGEs的可能性，我们计划使用本次使用的抗体6D12以外的抗体进一步研究这一点。此外，虽然无法建立小鼠日光弹性组织变性模型的原因尚不清楚，但有可能涉及紫外线以外的因素，我们计划结合紫外线和各种因素对此进行进一步研究。所以。

项目成果

Kumiko Mizutari et al.: "Photo-Enhanced Modification of Human Skin Elastin in Actinic Elastosis by N^ε-(Carboxymethyl)lysine.One of the Glvcoxidation of the Maillard Reaction" The Journal of Inverstigative Dermatology. 108. 797-802 (1997)

Kumiko Mizutari 等人：“N^ε-(羧甲基)赖氨酸对光化性弹性组织中人皮肤弹性蛋白的光增强修饰。美拉德反应的葡萄糖氧化之一”《皮肤病学研究杂志》108. 797-802 (1997)。 ）

萱島研一 他: "日光性弾性線維症におけるAGEの微細局在" 細胞. 30巻・13号. 26-30 (1998)

Kenichi Kayashima 等人：“日光弹性组织中 AGE 的精细定位”，Cell，第 30 卷，第 13 期，第 26-30 期（1998 年）。

Kumiko Mizutari et al.: "Photo-Enhanced Modification of Human Skin Elastin in Actinic Elastosis by N^ε-(Carboxmethyl) lysine, One of the Glycoxidation Products of the Maillard Reaction" The Journal of Investigative Dermatology. 108. 797-802 (1997)

Kumiko Mizutari 等人：“N^ε-（羧甲基）赖氨酸（美拉德反应的糖氧化产物之一）对光化性弹性组织中的人类皮肤弹性蛋白进行光增强修饰”《皮肤病学研究杂志》108. 797-802（ 1997）