ヘリコバクター・ピロリ熱ショック蛋白の胃・十二指腸慢性炎症反応における役割

幽门螺杆菌热休克蛋白在胃/十二指肠慢性炎症反应中的作用

• 批准号: 09770191
• 负责人: 山口 博之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770191/
• 关键词: Helicobacter pylori; 熱ショック蛋白; モノクローナル抗体; エピトープマッピング; 病原因子; HSP60; 付着; IL-8; 胃・十二指腸慢性炎症反応; 熱ショック蛋白HSP60; ヒト胃上皮細胞; インターロイキン(IL)8; ヒト胃上皮細胞への付着性

1. H.pyloriHSP60の発現と病原因子との関連性(1) H.pyloriHSP60の発現と病原因子との関連性:本菌のHSP60の発現、ウレアーゼ活性、空胞化毒素産生性およびヒト胃癌細胞株への付着率との間の相関性を検討した結果、本菌HSP60の発現と付着率との間に相関性が認められることを明らかにした(J.Gastroenterol.,1998,33:6-9)。(2) H.pylonHSP60の局在:本菌HSP60に対するH20モノクローナル抗体(mAb)によりH.pyloriの免疫電顕を行った。その結果、H20mAbは菌体内部のみならず菌体表層とも反応することから、本菌HSP60が菌体表層にも存在することを明らかにした(Microbiol.lmmunol.,1997,41:909-916)。(3) 本菌HSP60に対するH20モノクローナル抗体(mAb)によるH.pyloriのヒト胃癌由来細胞MKN4S株への付着阻止効果の検討:H20mAbでH.pylonを前処理することにより本菌のMKN45細胞への付着は阻止された。この結果は本菌のHSP60がヒト胃細胞への付着に直接関与していることを明らかにした(J.Med.Microbiol.,1997,46:825-831)。2. H.pyloriHSP60(1) H.pyloriHSP60を認識するmAbのエピトープの決定とそれに対するヒト免疫応答:以前確立したH.pyloriHSP60を認識するmAbのエピトープを決定し、その領域がヒトから種々の細菌HSP60に至まで広く保存されていることを明らかにした。またこの領域に対する免疫応答が感染防御に関与している可能性を示す結果も得ている。(2) H.pyloriHSP60のヒト胃癌由来細胞からのIL-8誘導能:アフィニティー精製したH.pyloriHSP60によりヒト胃癌由来細胞を刺激した結果、IL-8の誘導が確認された(J.Gastroenterol.,inpress)。またリコンビナント(r)H.pyloriHSP60の刺激においても同様な結果が得られた。これらの結果より本菌HSP60はIL-8の誘導に関与することが明らかになった。(3)rH.pyloriHSP60投与マウスにおける胃内病理学的変化の検討:rH.pyloriHSP60をコレラ毒素とともにC57BL/6マウスに経口投与したが胃内病理学的変化は認められなかった.しかしながらrH.pyloriHSP60とコレラ毒素を経口免疫した同系マウスにH.pyloriを感染させたところ顕著なびらん形成が確認された.

1. H. pylori HSP60表达与致病因素的关系（1） H. pylori HSP60 表达与致病因素的关系：通过考察 H. pylori HSP60 表达、脲酶活性、空泡毒素生产率以及对人胃癌细胞系的附着率之间的相关性，我们发现 H. pylori 是揭示HSP60的表达与粘附率之间存在相关性(J.Gastroenterol.，1998，33：6-9)。 (2)H.pylonHSP60的定位：使用针对该细菌的HSP60的H20单克隆抗体(mAb)进行H.pylori的免疫电子显微镜检查。结果，由于H20mAb不仅在细菌细胞内部反应，还在细菌细胞表面反应，因此表明该细菌HSP60也存在于细菌细胞表面(Microbiol.Immunol.，1997，41：909-916) 。 (3)检测该细菌的针对HSP60的H20单克隆抗体(mAb)对幽门螺杆菌与人胃癌来源的细胞系MKN4S粘附的影响：通过用H20 mAb预处理H. pylon，将该细菌抑制与 MKN45 细胞的粘附。该结果表明，该细菌的HSP60直接参与对人胃细胞的粘附(J.Med.Microbiol.，1997，46：825-831)。 2.识别H.pyloriHSP60的mAb表位的确定（1）H.pyloriHSP60及其人体免疫反应：确定了之前建立的识别H.pyloriHSP60的mAb的表位，并从人体中分离出了其区域据揭示，它广泛保守到HSP60。我们还获得的结果表明，对该区域的免疫反应可能与防止感染有关。 (2)H.pyloriHSP60从人胃癌来源的细胞诱导IL-8的能力：用亲和纯化的H.pyloriHSP60刺激人胃癌来源的细胞，结果确认了IL-8的诱导(J.胃肠病，印象）。当刺激重组 (r) 幽门螺杆菌 HSP60 时也获得了类似的结果。这些结果表明该细菌的HSP60参与IL-8的诱导。 (3)给予rH.pyloriHSP60的小鼠胃内病理变化的检查：将rH.pyloriHSP60与霍乱毒素一起口服给予C57BL/6小鼠，但没有观察到胃内病理变化，然而，当rH.pyloriHSP60存在的同种小鼠中时，未观察到胃内病理变化。口服免疫过幽门螺杆菌和霍乱毒素的人感染幽门螺杆菌后，观察到明显的糜烂形成。

项目成果

Hiroyuki Yamaguchi: "Role of heat-shock proterin(HSP60)homologue of Helicobacter pylori in gastric mucosal inflammation following H.pylori infection." J.Gastroenterol.(in press).

Hiroyuki Yamaguchi：“幽门螺杆菌热休克蛋白（HSP60）同源物在幽门螺杆菌感染后胃粘膜炎症中的作用。”

山口博之 等: "Helicobacter pylori熱ショック蛋白(HSP60)と胃上皮細胞への付着性との関連性" CYTOMETRY RESEARCH. 7(2). 51-55 (1997)

Hiroyuki Yamaguchi 等人：“幽门螺杆菌热休克蛋白 (HSP60) 与胃上皮细胞粘附之间的关系”CYTOMETRY RESEARCH 7(2) (1997)。

H.Yamaguchi et al.: "Heat-shock protein 60 homologue of Helicobacter pylori is associated with adhesion of H.pylori to human gastric epithelial cell" Journal of Medical Microbiology. 46(10). 825-831 (1997)

H.Yamaguchi 等人：“幽门螺杆菌的热休克蛋白 60 同源物与幽门螺杆菌对人胃上皮细胞的粘附有关”《医学微生物学杂志》。

H.Yamaguchi et al.: "Production and characterisation of monoclonal antibodies to heat-shock protein 60 of Helicobacter pylori" Journal of Medical Microbiology. 46(10). 819-824 (1997)

H.Yamaguchi 等人：“幽门螺杆菌热休克蛋白 60 的单克隆抗体的生产和表征”医学微生物学杂志。

H.Yamaguchi et al.: "Relationship between expression of HSP60,urease activity,production of vacuolating toxin and adherence activity of Helicobacter pylori" Journal of Gastroenterology. (in press). (1998)

H.Yamaguchi等人：“幽门螺杆菌HSP60表达、脲酶活性、空泡毒素产生和粘附活性之间的关系”胃肠病学杂志。