内分泌かく乱物質投与によるマウス精巣の乳酸脱水素酵素アイソザイム形成過程の解明

阐明因施用内分泌干扰物而导致小鼠睾丸中乳酸脱氢酶同工酶形成的过程

• 批准号: 20929001
• 负责人: 鈴木 英明
• 金额: $ 0.37万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929001/
• 关键词: 乳酸脱水素酵素; 核因子I; 分子生物学

乳酸脱水素酵素(LDH)-xアイソザイムが組織特異的に機能する過程を解明するために、7週齢のBALB/c CrSlcマウスにn-butyl-p-hydroxybenzoate(BHB)を100mg/kg、25mg/kgおよび10mg/kgずつ6週間腹腔内投与する実験を試みた。対照はBHBの代わりにdimethyl sulfoxideを投与した。マウスは麻酔開腹後、直ちにDiethylpyrocarbonate処理したリン酸緩衝液(PBS)で還流し精巣を摘出、臓器重量当たりの精子数をカウントした。また、臓器はPBSで洗浄し-80℃で保存した。LDH-xアイソザイム分画はベロナール緩衝液を用いて電気泳動後、LDH活性染色を行った。LDH-xを形成する遺伝子LDH-CのmRNA発現量は、抽出したmRNAからcDNAを合成後、β-Actin遺伝子を内部標準遺伝子とする半定量的PCR法で解析した。核抽出物を抗各転写因子(NF I)抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した。その結果、BHBの精子形成抑制に従い、LDH-xアイソザイム分画比は減少傾向であった。また、BHB投与によるLDH-CのmRNA発現量に優位な差は認められなかった。さらに、LDH-xアイソザイムの形成に関与する転写翻訳因子を特定するために、抗NF I抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した結果、BHB投与量が増加するに従い、NF Iがやや増加する傾向がみられた。これらのことから、BHBは核内NF I量を増加させる作用をもち、さらにNF-I増加によりLDH-C遺伝子発現が抑制された結果、LDH-Cアイソザイム量が減少したと推測する。今回、LDH-Cアイソザイム発現因子の一部が明らかになったことは、LDH-xアイソザイム研究として有意義である。

为了阐明乳酸脱氢酶（LDH）-X同工酶的组织特异性功能，我们尝试了一个实验，在该实验中，将N-丁基 - 羟基羟基苯甲酸酯（BHB）腹膜内内置为7周大的BAL/C CRSLB/C CRSLC小鼠，用于6周。对照将二甲基亚硫氧化物代替BHB。麻醉后，将小鼠立即用二乙基碳酸盐处理的磷酸盐缓冲液（PBS）回流以去除睾丸，并计算每个器官重量的精子数量。器官还用PBS洗涤，并保存在-80°C下。使用veronal缓冲液对LDH-X同工酶分数进行电泳，然后用LDH活性染色。在从提取的mRNA中合成cDNA后，使用β-肌动蛋白基因作为内标基因分析了形成LDH-X的基因LDH-C的mRNA表达水平。使用抗特异性转录因子（NF I）抗体通过蛋白质印迹分析核提取物。结果，随着BHB抑制精子发生，LDH-X同工酶分数往往会降低。此外，给药后LDH-C的mRNA表达水平未观察到主要差异。此外，为了确定与LDH-X同工酶形成有关的转录翻译因子，使用抗NF I抗体进行了蛋白质印迹进行分析，并发现随着BHB剂量的增加，NF I倾向于略有增加。从这些结果中可以推测，BHB具有增加核系统中NF I量的作用，并且由于NF-I抑制LDH-C基因表达的增加，LDH-C同工酶的量减少了。这次，对某些LDH-C同工酶表达因子的澄清对于LDH-X同工酶研究很重要。

项目成果

ブチルパラベン誘導体投与によるマウス清掃乳酸脱水素酵素アイソザイムの変化

给予对羟基苯甲酸丁酯衍生物对小鼠清除乳酸脱氢酶同工酶的变化

• 发表时间: 2008
• 作者: Hidaka N;Li B;Suemaru K;Araki H;飛鷹範明;山下梨沙子;鈴木英明
• 通讯作者: 鈴木英明