口腔内細菌叢の局在性を利用した法科学資料に付着するヒト唾液の由来推定に関する研究

利用口腔菌群定位推测法医材料上附着的人类唾液来源的研究

基本信息

批准号：
18H00497
负责人：
大田隼
金额：
$ 0.34万
依托单位：
神奈川県警察科学捜査研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00497/
关键词：
唾液細菌DNA 由来推定

项目摘要

傷害や性犯罪事件等の鑑定実務において、資料に付着する唾液の由来が犯罪事実(咬む、舐める等)を認定する上で争点となる場合がある。しかしながら、現在汎用される唾液の同定法は唾液アミラーゼ活性を指標としているため、その区別は困難である。そこで、本研究では、ヒトの口腔内に普遍的に存在する口腔内細菌叢の局在性に着目し、生息域の異なる複数の細菌を同時に検出・比較することで、物体に付着する唾液の由来を推定する方法の開発を試みた。唾液の由来推定に用いる細菌は、先行研究のあるStreptococcus salivariusおよびVeillonella atypicaをはじめ、Streptococcus oralis、Prevotella maculosa、Staphylococcus epidermidisおよびActinomyces israeliiを加えた計6種で検討を行った。ヒトの舌、歯、口唇から採取した唾液と滴下唾液を対照試料とし、布を用いて模擬試料を作製した。また、模擬試料を室温で約1ケ月間保存して陳旧試料とした。各試料から細菌DNAを抽出し、リアルタイムPCRにより総細菌DNAを定量して鋳型DNA量を標準化した後、6種の標的細菌DNAおよび総細菌DNAをPCR増幅した。続いて、PCR増幅産物を電気泳動し、各PCR増幅産物に由来するバンドの蛍光強度を定量化し、多変量解析した。各試料について、6種の細菌DNAの存在比を主座標分析した結果、歯と口唇に由来する唾液の対照試料および模擬試料は、それぞれ類似した特徴を示したが、舌と滴下に由来する唾液の対照試料および模擬試料はともに同様の特徴を示した。また、陳旧試料の解析の結果、上記の特徴は変化し、いずれの対照試料においても陳旧試料との間に類似性は認められなかった。本研究により、歯および口唇の接触に由来して付着した唾液については、他と識別できる可能性が示唆された。今後は、唾液が付着する物体の種類が解析に及ぼす影響等を検討し、実務適用可能な唾液の由来推定法の開発を試みる。一方、今回の検討では舌および滴下に由来する唾液については識別が困難であったため、標的とする細菌の種類を変更する等の検討を進める予定である。

在诸如伤害和性犯罪案件之类的评估工作中，附属于材料的唾液的起源可能是承认犯罪事实（咬人，舔等）的问题。但是，很难区分，因为目前是普通的唾液的身份基于唾液淀粉酶的活性。因此，这项研究的重点是普遍存在于人类口腔中的口腔菌群的定位，同时检测并比较了多种细菌与不同的栖息地，因此它遵守了物体。。用于估计唾液起源的细菌是唾液链球菌和veillonella artypica，口腔链球菌，葡萄球菌，总共检查了六种类型的pidermidis和settinomyces以色列人。用一块布有人舌，牙齿和从嘴唇和滴唾液的滴水唾液创建了一个模拟样本。此外，模拟样品在室温下存储约一个月，以使其成为旧样本。从每个样品中提取细菌DNA后，通过实时PCR量化总细菌DNA，以标准化模板DNA的量，六个靶细菌DNA和总DNA扩增的PCR。随后，PCR放大产物进行电泳，量化了从每个PCR放大器产物得出的频带的荧光强度，并分析了大量。对于每个样品，由于六个细菌DNA的存在的主要坐标，源自牙齿和嘴唇的唾液的对比样品和模拟样品显示出相似的特征，但唾液源自舌头和滴滴样本和模拟样本都是相似的特征。另外，由于对旧样本的分析，上述特征发生了变化，并且在任何对照样本中与旧样本中都没有发现相似性。这项研究表明，附属于牙齿和嘴唇接触的唾液可能被识别为其他人。将来，我们将研究粘附于唾液对分析等的对象类型的影响，并将尝试开发一种可以在实践中使用的唾液起源的方法。另一方面，在这项研究中，很难识别从舌头和滴剂中得出的唾液，因此我们计划改变靶细菌的类型。