口腔内細菌叢の局在性を利用した法科学資料に付着するヒト唾液の由来推定に関する研究

利用口腔菌群定位推测法医材料上附着的人类唾液来源的研究

基本信息

批准号：
18H00497
负责人：
大田隼
金额：
$ 0.34万
依托单位：
神奈川県警察科学捜査研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00497/
关键词：
唾液細菌DNA 由来推定

项目摘要

傷害や性犯罪事件等の鑑定実務において、資料に付着する唾液の由来が犯罪事実(咬む、舐める等)を認定する上で争点となる場合がある。しかしながら、現在汎用される唾液の同定法は唾液アミラーゼ活性を指標としているため、その区別は困難である。そこで、本研究では、ヒトの口腔内に普遍的に存在する口腔内細菌叢の局在性に着目し、生息域の異なる複数の細菌を同時に検出・比較することで、物体に付着する唾液の由来を推定する方法の開発を試みた。唾液の由来推定に用いる細菌は、先行研究のあるStreptococcus salivariusおよびVeillonella atypicaをはじめ、Streptococcus oralis、Prevotella maculosa、Staphylococcus epidermidisおよびActinomyces israeliiを加えた計6種で検討を行った。ヒトの舌、歯、口唇から採取した唾液と滴下唾液を対照試料とし、布を用いて模擬試料を作製した。また、模擬試料を室温で約1ケ月間保存して陳旧試料とした。各試料から細菌DNAを抽出し、リアルタイムPCRにより総細菌DNAを定量して鋳型DNA量を標準化した後、6種の標的細菌DNAおよび総細菌DNAをPCR増幅した。続いて、PCR増幅産物を電気泳動し、各PCR増幅産物に由来するバンドの蛍光強度を定量化し、多変量解析した。各試料について、6種の細菌DNAの存在比を主座標分析した結果、歯と口唇に由来する唾液の対照試料および模擬試料は、それぞれ類似した特徴を示したが、舌と滴下に由来する唾液の対照試料および模擬試料はともに同様の特徴を示した。また、陳旧試料の解析の結果、上記の特徴は変化し、いずれの対照試料においても陳旧試料との間に類似性は認められなかった。本研究により、歯および口唇の接触に由来して付着した唾液については、他と識別できる可能性が示唆された。今後は、唾液が付着する物体の種類が解析に及ぼす影響等を検討し、実務適用可能な唾液の由来推定法の開発を試みる。一方、今回の検討では舌および滴下に由来する唾液については識別が困難であったため、標的とする細菌の種類を変更する等の検討を進める予定である。

在检查伤害或性犯罪案件的实践中，在确定刑事事实（咬人，舔等）时，附属于文件的唾液的起源可能会成为争论的话题。但是，当前使用的唾液鉴定方法使用唾液淀粉酶活性作为指标，因此很难区分它。因此，在这项研究中，我们专注于人类口腔中普遍存在的口腔微生物菌群的定位，并试图通过同时检测和比较多种细菌与不同栖息地来估算物体附着在物体上的唾液的起源。总共研究了六种用于估计唾液的细菌，其中包括先前已经研究过的唾液链球菌和veillonella atypica，以及口腔链球菌，prevotella maculosa，prevotella covocococosa，prevotella copcocococcus cococcus ostermidis and chistinymodiss and actymoserces israomyces israomyces israymomidis。从人的舌头，牙齿和嘴唇收集的唾液和滴水唾液被用作对照样品，并用布制备了模拟样品。此外，将模拟样品在室温下存储约一个月，以形成旧样品。从每个样品中提取细菌DNA，并通过实时PCR定量总细菌DNA，以使模板DNA的量标准化，然后将六个靶标细菌DNA和总细菌DNA放大。随后，将PCR扩增产物电泳以量化从每种PCR扩增产物中得出的频带的荧光强度，并进行了多变量分析。对于每个样品，对六种细菌DNA物种的丰度比的主要坐标分析表明，虽然源自牙齿和嘴唇的唾液的对照和模拟样本表现出相似的特征，但源自舌头和掉落的唾液的对照和模拟样本都显示出相似的特征。此外，对陈的旧样品的分析表明，上述特征发生了变化，并且在任何一个对照样品中，陈的旧样品之间均未观察到相似性。这项研究表明，附着在牙齿上的唾液可以与其他唾液区分开。将来，我们将研究唾液遵守其对分析的对象类型的影响，并尝试开发一种估计可以在实践中应用的唾液起源的方法。另一方面，由于很难将唾液与舌头和滴水区分开，因此本研究计划继续研究改变针对的细菌的类型。