アルツハイマー病遺伝子が誘導する神経細胞死抑制因子受容体の同定と機能解析

阿尔茨海默病基因诱导的神经细胞死亡抑制受体的鉴定及功能分析

• 批准号: 12780587
• 负责人: 安川 孝史
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780587/
• 关键词: アルツハイマー病; 神経細胞死; 受容体; 細胞死拮抗因子; 細胞死; パニング法

1.細胞表面の受容体数の予測細胞死抑制因子のS14G変異体の合成ペプチドをI-125で標識し、培養神経細胞F11に添加した後に架橋剤を用いて結合蛋白に固定して、細胞の放射活性を測定した。この放射活性は非標識体ペプチドを過剰に添加すると低下し、細胞死抑制効果のない変異体ペプチドでは顕著な変化が認められず、特異的な受容体の存在が再確認された。F11細胞に結合した放射活性量から、細胞表面のレセプター数は数百個程度と概算された。2.受容体下流のシグナル分析細胞内シグナル因子の阻害剤を用いて細胞死抑制因子の効果への影響を薬理学的に検討した。抑制因子の作用は、MAPキナーゼ阻害剤PD98059やPI-3キナーゼ阻害剤wortmanninでは変化がなく、チロシンキナーゼ阻害剤genisteinで完全に抑制された。さらに、チロシンキナーゼのひとつJAK2キナーゼ阻害剤AG490でも抑制された。よって、細胞死抑制因子のシグナルは受容体からチロシンキナーゼ特にJAK/STAT系を介して伝達されると推測された。3.レセプター同定への検討JAK/STATを活性化させる受容体として、成長ホルモンの様な単一受容体とサイトカインのようにgp130と共同で受容体の機能を果たす受容体が考えられた。パニング法による受容体探索が成功しなかったことから、この神経細胞死抑制因子の受容体は後者である可能性が高いと推測された。そこで、gp130を必要とする既知の受容体のアミノ酸配列から機能的には未知の複数の受容体候補を探索してその機能を確認している。

1。预测细胞表面上的受体数量S14G突变体的合成肽是一种细胞死亡抑制剂，用I-125标记，添加到培养的神经元F11中，然后使用交叉链接器固定在结合蛋白上，以测量细胞的放射性。当添加未标记的肽过量时，这种放射性降低了，并且在突变肽中未观察到对抑制细胞死亡没有影响的突变肽的显着变化，从而重申了特定受体的存在。基于与F11细胞结合的放射性活性的量，估计细胞表面的受体数量约为数百个。 2。使用细胞内信号因子抑制剂对受体下游的信号分析，细胞死亡抑制剂对细胞死亡抑制剂作用的影响。 MAP激酶抑制剂PD98059或PI-3激酶抑制剂wortmannin不会改变抑制剂的效果，并且被酪氨酸激酶抑制剂染料蛋白酶完全抑制。此外，它也受到JAK2激酶抑制剂AG490的抑制，该抑制剂是酪氨酸激酶之一。因此，据推测，细胞死亡抑制剂的信号是通过酪氨酸激酶（尤其是JAK/STAT系统）从受体传播的。 3。研究受体鉴定作为激活JAK/STAT的受体，一种受体，例如生长激素，以及与GP130结合使用的受体的受体，例如细胞因子。由于基于平移的受体搜索未成功，因此据推测后一种受体可能是后者。因此，我们从已知受体的氨基酸序列中搜索了多个功能未知的受体候选，需要GP130确认其功能。

项目成果

Niikura T., et al.: "Insulin-like growth factor I(IGF-I)protects cells from apoptosis by Alzheimer's V642I mutant amyloid precursor protein through IGF-I receptor in an IGF-binding protein-sensitive manner"Jourmal of Neuroscience. 21. 1902-1910 (2001)

Niikura T. 等人：“胰岛素样生长因子 I (IGF-I) 通过 IGF-I 受体以 IGF 结合蛋白敏感的方式保护细胞免受阿尔茨海默病 V642I 突变淀粉样前体蛋白的凋亡”《神经科学杂志》。

Sudo H., et al.: "Secreted Aβ does not mediate neurotoxicity by antibody-stimulated amyloid precursor protein"Biochemical and Biophysical Research Communications. 282. 548-556 (2001)

Sudo H.等人：“分泌的 Aβ 不会通过抗体刺激的淀粉样前体蛋白介导神经毒性”《生物化学和生物物理研究通讯》282. 548-556 (2001)。

Niikura,T et al.: "IGF-I protects cells from apoptosis by Alzheimer's V6421 mutant APP through IGF-I receptor in an IGF binding protein-sensitive manner."TheJournal of Neuroscience. (In press). (2000)

Niikura,T 等人：“IGF-I 通过 IGF-I 受体以 IGF 结合蛋白敏感的方式保护细胞免受阿尔茨海默病 V6421 突变体 APP 的凋亡。”神经科学杂志。

Matsuda S., et al.: "c-Jun N-terminal kinase (JNK)-interacting protein-1b/islet-brain-1 scaffolds Alzheimer's amyloid precursor protein with JNK"Jourmal of Neuroscience. 21. 6597-6607 (2001)

Matsuda S.等人：“c-Jun N-末端激酶（JNK）相互作用蛋白-1b/islet-brain-1 用 JNK 支架阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白”《神经科学杂志》。

Sudo, H et al.: "Antibody-regulated neurotoxic function of cell surface β-amyloid precursor protein."Molecular and Cellular Neuroscience. 16. 708-723 (2000)

Sudo, H 等人：“细胞表面 β-淀粉样前体蛋白的抗体调节的神经毒性功能。”分子和细胞神经科学。 16. 708-723 (2000)