マウス全胚培養法を用いた中脳黒質ドーパミンニューロンの移動の機序の解析

小鼠全胚胎培养法分析中脑黑质多巴胺神经元的迁移机制

• 批准号: 09780708
• 负责人: 大山 恭司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780708/
• 关键词: L1; 6B4 proteoglycan; phosphacan; Mesencephalon; Dopamine neuron; Migration; NCAM-H

1. 全胚培養法を利用した抗L1抗体による阻害実験胎生10日のマウス胎仔の脳室内に抗L1抗体を注入した後、回転培養を行った。2日間培養した後、4%パラフォノレムアルデヒドにて固定、10μm厚の凍結切片を作製し、ドーパミン(DA)ニューロンの分布をマーカーであるtyrosine hydroxylase(TH)に対するウサギポリクローナル抗体で検討した。抗L1抗体を注入した場合もDAニューロンの分布に変化は認められなかったことにより、L1はDAニューロンの移動に必須でないと考えられた。2.6B4 proteoglycan(6B4PG)欠損マウス、L1欠損マウスを用いた中悩ドーパミン(DA)ニューロンの解析6B4PG欠損マウスおよびL1欠損マウスの組織絹切片(胎生16日-生後1日)を作製し、抗TH抗体で染色を行った。しかしながら、いずれのノックアウトマウスにおいてもTH免疫陽性のDAニューロンの分布に差異は認められなかった。以上の結果から、DAニューロンの移動に関し、6B4PG,L1はそれぞれ必須でないことが示された。しかしながら、6B4PGノックアウトマウスを解析した結果、6B4PGが高い発現を示す間脳あるいは大脳辺縁系において、カルシウム結合蛋白質calbindinに免疫陽性をニューロンの突起の発達が悪いことが明らかとなった。従って、6B4PGはニューロンの分化、成熟に重要な関与をしている可能性が示された。今後、6B4PGノックアウトマウスにおけるニューロンの分化の異常について、更に解析を行う予定である。また、DAニューロンの細胞移動については、6B4PG、L1ダブルノックアウトマウスを作製し検討を続ける予定である。

1。使用整个胚胎培养方法的抑制性L1抗体在胎儿心室的第10天注入小鼠胎儿脑中，然后培养。培养两天后，固定了4％的释放醛醛，并产生了10μm厚的冷冻片，并用兔多克隆抗体在酪氨酸羟化酶（TH）上使用兔多克隆抗体检查了多巴胺（DA）神经元的分布。当注入抗-L1抗体时，未识别DA神经元的分布，因此L1对于DA神经元的运动并不是必不可少的。 2.6b4蛋白聚糖（6B4PG）小鼠缺乏小鼠，中等问题多巴胺（DA）神经元分析6B4PG缺乏小鼠和L1缺乏的小鼠组织丝绸切割（出生后16天1天胚胎）和抗抗体抗染料。但是，任何基因敲除小鼠中TH免疫阳性DA神经元的分布没有差异。以上结果表明，DA神经元的运动不需要6b4pg和L1。然而，对6B4PG敲除小鼠的分析表明，在间歇性或脑EDI系统中，神经元阳性中免疫阳性的发展，表明6B4 pg表达高表达。因此，表明6b4pg可能参与神经元的分化和成熟。将来，我们计划进一步分析6B4pg敲除小鼠中神经元的异常。此外，将产生6B4 PG和L1双基因敲除小鼠，并将继续考虑用于DA神经元的细胞运动。

项目成果

K.Ohyama et al.: "Coordinate expression of L1 and 6B4 proteoglycan/phosphacan is correlated with the migration of mesencephalic dopaminergic neurons in mice." Dev.Brain Res.107. 219-226 (1998)

K.Ohyama 等人：“L1 和 6B4 蛋白聚糖/磷酸聚糖的协调表达与小鼠中脑多巴胺能神经元的迁移相关。”

K.Ohyama et al.: "Coordinate expression of L1 and 6B4 proteoglycan/phosphacan is correlated with the migration of mesencephalic dopaminergic neurons in mice." Dev.Brain Res.(in press). (1998)

K.Ohyama 等人：“L1 和 6B4 蛋白聚糖/磷酸聚糖的协调表达与小鼠中脑多巴胺能神经元的迁移相关。”