革新的CAR-T細胞療法の開発を目指した腹膜播種免疫抑制機構の解明と克服

阐明并克服腹膜播散的免疫抑制机制，以开发创新的CAR-T细胞疗法

• 批准号: 22K16876
• 负责人: 芳川 修久
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16876/
• 关键词: キメラ抗原受容体; メソセリン; 腫瘍微小環境; 免疫トレランス; 卵巣癌; 腹膜播種

CAR-T細胞製造に関するプロトコルを決定し、PBMCあるいはCD3陽性細胞へのレンチウイルスベクター法で概ね50%程度の遺伝子導入効率を達成することが常時可能となる製造方法を決定した。CAR構造は最もシンプルなCD3ζとCD28膜貫通ドメインを連結したCARとしており、MSLN発現卵巣癌細胞の細胞傷害性を確認した。これにより抗MSLN CAR-T細胞が安定的に作成できることを確認した。CAR-T細胞の抗腫瘍効果の評価系については、CFSE染色によるCAR-T細胞の増殖アッセイならびにIFNγ発現をFACSで定量化することにより活性化CAR-T細胞を定量可能とする系を確立した。またKillingの評価としてLuciferase発現×MSLN発現卵巣癌細胞株の樹立をして、発光定量化によりKillingの定量化を可能にした。CAR-T細胞の樹立と抗腫瘍効果の評価系に加えて、疲弊化モデルの構築に着手した。既報に存在する液性因子を用いて疲弊化を誘導し、上記の抗腫瘍効果評価系によってCAR-Tの機能が抑制されることを確認した。これは再現性を含めて確認していく必要があると思われる。卵巣癌にMSLNおよびLuciferaseを強制発現させた細胞株を作成し、マウスに皮下投与する動物モデルを用いたCAR-T細胞投与により一定の腫瘍縮小効果が確認された。このモデルをベースにしながら、疲弊化を克服できる機能を付与した新たなCAR-T細胞のin vivoにおける評価モデルとして活用していく予定としている。

我们确定了 CAR-T 细胞生产方案，并确定了一种生产方法，使用慢病毒载体方法将基因转移到 PBMC 或 CD3 阳性细胞中，始终能实现约 50% 的基因转移效率。 CAR结构是最简单的，是CD3δ和CD28跨膜结构域连接的CAR，并且证实了表达MSLN的卵巢癌细胞的细胞毒性。这证实了可以稳定地产生抗MSLN CAR-T细胞。关于CAR-T细胞的抗肿瘤效果的评价系统，我们建立了通过使用CFSE染色测定CAR-T细胞的增殖并使用FACS定量IFNγ表达来定量活化的CAR-T细胞的系统。此外，为了评估杀伤作用，我们建立了表达荧光素酶和 MSLN 的卵巢癌细胞系，使得通过量化发光来量化杀伤作用成为可能。除了建立CAR-T细胞和抗肿瘤疗效评估体系外，我们还开始构建耗竭模型。使用先前报道的体液因子诱导疲劳，上述抗肿瘤效果评估系统证实了CAR-T功能受到抑制。似乎有必要确认这一点，包括再现性。创建了在卵巢癌中强制表达MSLN和荧光素酶的细胞系，并通过皮下注射的动物模型将CAR-T细胞给予小鼠，确认了一定的肿瘤减少效果。基于这个模型，我们计划将其用作具有克服衰竭能力的新型CAR-T细胞的体内评估模型。

项目成果

Who are the long-term survivors of recurrent ovarian carcinoma?: a retrospective analysis of a multicenter study

谁是复发性卵巢癌的长期幸存者？：多中心研究的回顾性分析

• DOI: 10.1007/s10147-022-02214-9
• 发表时间: 2022
• 期刊: International Journal of Clinical Oncology
• 影响因子: 3.3
• 作者: Yoshihara Masato;Mogi Kazumasa;Kitami Kazuhisa;Uno Kaname;Iyoshi Shohei;Tano Sho;Fujimoto Hiroki;Miyamoto Emiri;Yoshikawa Nobuhisa;Emoto Ryo;Matsui Shigeyuki;Kajiyama Hiroaki
• 通讯作者: Kajiyama Hiroaki

Novel therapeutic strategies targeting UCP2 in uterine leiomyosarcoma

• DOI: 10.1016/j.phrs.2023.106693
• 发表时间: 2023-02-14
• 期刊: PHARMACOLOGICAL RESEARCH
• 影响因子: 9.3
• 作者: Nagao，Yukari;Yokoi，Akira;Kajiyama，Hiroaki
• 通讯作者: Kajiyama，Hiroaki

腫瘍微小環境の免疫トレランス克服を目指した キメラ抗原受容体導入養子細胞免疫療法の開発

使用嵌合抗原受体开发过继细胞免疫疗法来克服肿瘤微环境中的免疫耐受

• 发表时间: 2022
• 作者: Yoshihara Masato;Mogi Kazumasa;Kitami Kazuhisa;Uno Kaname;Iyoshi Shohei;Tano Sho;Fujimoto Hiroki;Miyamoto Emiri;Yoshikawa Nobuhisa;Emoto Ryo;Matsui Shigeyuki;Kajiyama Hiroaki;芳川 修久
• 通讯作者: 芳川 修久

Downregulating vaccinia-related kinase 1 by luteolin suppresses ovarian cancer cell proliferation by activating the p53 signaling pathway

• DOI: 10.1016/j.ygyno.2023.04.003
• 发表时间: 2023-04-17
• 期刊: GYNECOLOGIC ONCOLOGY
• 影响因子: 4.7
• 作者: Chang，Xuboya;Tamauchi，Satoshi;Kajiyama，Hiroaki
• 通讯作者: Kajiyama，Hiroaki

Niraparib as a therapeutic agent for the treatment of ovarian cancer meningeal dissemination with BRCA1 mutation

尼拉帕尼作为治疗 BRCA1 突变卵巢癌脑膜播散的治疗剂

• DOI: 10.1111/jog.15663
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Obstetrics and Gynaecology Research
• 影响因子: 1.6
• 作者: Nei Takashi;Tamauchi Satoshi;Ikeda Yoshiki;Yoshikawa Nobuhisa;Niimi Kaoru;Kajiyama Hiroaki
• 通讯作者: Kajiyama Hiroaki