Development of a biomarker for predicting the efficacy of cancer chemoimmunotherapy using telomere length

开发利用端粒长度预测癌症化学免疫疗法疗效的生物标志物

• 批准号: 22K16812
• 负责人: 細越 正吾
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16812/
• 关键词: テロメア; 免疫療法; バイオマーカー; テロメア長

固形腫瘍に対する癌免疫療法は実臨床でも多くの患者に使用されているが、多くの患者には奏功せず、重篤な免疫関連有害事象も大きな問題である。有効な分子マーカーも発見されておらず、現状では免疫療法の効果を予測することは困難である。そこで我々は免疫細胞のストレス状態が免疫療法の効果に重要な役割を果たしているのではないかと考えた。近年白血球を用いたテロメア長の測定が可能となり、白血球細胞のテロメア長から長期的なストレスが、テロメアGテールから短期的なストレスが推測できるようになった。現在、免疫細胞の疲弊を評価する方法は開発されておらず、これらテロメア長を用いたツールが免疫細胞のストレス負荷を評価し免疫療法の効果を予測できる可能性がある。本研究では免疫細胞のテロメアとテロメアGテールを用いて癌免疫療法の効果を予測するバイオマーカーの開発を目指すと同時に、癌患者における白血球テロメア長の意義も検討する。本年度は93例の血液サンプルを収拾し、以下の方法でテロメア測定を行った。検体の内訳は健常コントロール11名、前立腺癌2名、腎細胞癌36名、尿路上皮癌44名である。現在、治療効果情報と紐づけしており、結果の取りまとめを行っている。１）染色体DNAの精製後、100 ng/uL DNA溶液を95℃で10分間熱変性させ、5分間氷中に放置した。その後、200 ng/10uLになるように希釈したDNA溶液にアクリジュームエステルで標識した29-merのテロメアプローブが入ったハイブリダイゼーション溶液10uLを加え、60℃で10分間反応させた。その後、加水分解溶液30uLを加え、60℃で10分間反応させ過剰量のDNAに結合しなかったテロメアプローブを加水分解した。40 uLを96ウエルホワイトプレートに分注し、過酸化水素水溶液20uLと水酸化ナトリウム溶液10 uLを添加し、DNAに結合したテロメアプローブ量を発光量としてEnVision機器にて測定した。

实体瘤的癌症免疫疗法在临床实践中应用于许多患者，但在许多患者身上并不成功，严重的免疫相关不良事件也是一大问题。目前尚未发现有效的分子标志物，目前很难预测免疫治疗的效果。因此，我们推测免疫细胞的应激状态可能对免疫治疗的有效性发挥重要作用。近年来，使用白细胞测量端粒长度已经成为可能，并且可以从白细胞的端粒长度推断长期压力，从端粒G尾推断短期压力。目前，还没有开发出评估免疫细胞耗竭的方法，利用端粒长度的工具或许能够评估免疫细胞的应激负荷并预测免疫治疗的有效性。在这项研究中，我们的目标是开发一种生物标志物，利用免疫细胞端粒和端粒 G 尾来预测癌症免疫治疗的有效性，同时还检查白细胞端粒长度在癌症患者中的重要性。今年，我们采集了 93 名患者的血液样本，并使用以下方法测量了他们的端粒。样本包括 11 名健康对照者、2 名前列腺癌患者、36 名肾细胞癌患者和 44 名尿路上皮癌患者。我们目前正在将结果与治疗效果信息联系起来并编译结果。 1) 染色体DNA纯化后，将100ng/uL DNA溶液在95℃下热变性10分钟，并在冰上放置5分钟。然后，将10uL含有吖啶酯标记的29聚体端粒探针的杂交溶液添加至稀释至200ng/10uL的DNA溶液中，并将混合物在60℃反应10分钟。然后，加入30uL水解液，在60℃下反应10分钟，水解未与过量DNA结合的端粒探针。将40μL分装到96孔白色板中，加入20μL过氧化氢水溶液和10μL氢氧化钠溶液，使用EnVision装置以发光的形式测量与DNA结合的端粒探针的量。